从转染的哺乳动物细胞中收获腺相关病毒

从含有转染后哺乳动物细胞的多层细胞培养室开始，这些细胞可产生腺相关病毒载体。细胞培养室有助于获得高产量的病毒收获物。

剧烈振荡培养容器，使贴壁细胞脱落，将含有病毒的细胞及细胞外病毒颗粒释放到培养基中。

将内容转移至离心管中，离心以沉淀含有病毒的细胞。

收集含有细胞外病毒的上清液，并将其转移至储存瓶中。

用裂解缓冲液重悬沉淀，并孵育。

缓冲液中的酶和去垢剂可裂解细胞，使完整的细胞内病毒释放到溶液中。

离心裂解液以沉淀细胞碎片。收集含有病毒的上清液，并将其加入含有细胞外病毒的同一储存瓶中。

将粗制病毒悬液保存在低温下，直至进行后续纯化。

孵育结束后，剧烈摇动细胞培养容器，使细胞脱落，直至培养基呈现浑浊状态，然后将其倒入四个 500 毫升离心管中。

在4 °C条件下，以18,000 × g离心30分钟，使细胞沉淀。将澄清的上清液倒入一个1 L的PETG瓶中，并在500 mL离心管中用50 mL裂解缓冲液重悬细胞沉淀。在37 °C下孵育60分钟。

孵育后，于18,000 × g离心30分钟，将上清液转移至同一个1升PETG瓶中。于-80摄氏度保存。