0 次观看 • 3:35 分钟 • August 31st, 2026
从含有腺相关病毒（AAV）载体和宿主来源污染物的过滤细胞裂解液开始。
将裂解液通过基于肝素的亲和层析柱。
病毒衣壳蛋白通过静电作用与带负电荷的肝素基团结合。
用缓冲液冲洗层析柱，以去除未结合的污染物。
加入含去污剂的缓冲液以溶解膜状碎片。
用不含去污剂的缓冲液再次冲洗。
加入含有阳离子的缓冲液以建立离子环境，然后用中等盐浓度的缓冲液洗涤，以去除弱结合的杂质。
加入高盐缓冲液以破坏衣壳与肝素之间的相互作用，从而洗脱病毒颗粒。
收集富含完整病毒颗粒的洗脱组分，并将其转移至装有滤膜的离心浓缩管中。
离心管子以去除过量缓冲液，然后将浓缩的病毒组分收集到一个管中。
用缓冲液冲洗膜以回收残留的病毒颗粒，最大限度提高产量。
在 4 摄氏度下过夜解冻粗裂解液。
解冻后，使用 0.22 微米滤器进行过滤。在纯化步骤开始前，立即向每根正在使用的肝素-Sepharose 柱中加入 4 毫升滤器预处理缓冲液，以钝化离心浓缩装置。将管路放入蠕动泵中。
依次运行溶液和培养基。将五毫升肝素-Sepharose柱连接到管路以进行层析，并让25毫升Bazell DMEM流经层析柱。然后以每秒一至两滴的流速，将0.2微摩尔的过滤后粗裂解液上样至层析柱中。
依次用含镁和钙的300毫摩尔氯化钠HBSS缓冲液各5毫升洗涤柱子五次，分别标记五次洗脱液为E1至E5。准备就绪后，将含有预处理缓冲液的离心浓缩器在900 × g下离心2分钟，弃去滤过液。用4毫升含镁和钙的HBSS缓冲液洗涤离心浓缩器滤膜，在1000 × g下离心2分钟。
然后将洗脱液 E2 加入离心浓缩器中，在 1000 × g 条件下离心 5 分钟。弃去滤过液。同样，将洗脱液 E3 离心至浓缩病毒体积约为 1 毫升。
使用 P200 滤芯吸头从离心浓缩装置中移除浓缩的病毒，并将其收集到无菌的 1.5 毫升离心管中。收集病毒后，用 200 微升含镁和钙的 HBSS 冲洗离心浓缩装置。剧烈吹打 30 秒，以脱离任何黏附在膜上的病毒，并将浓缩的病毒收集到同一个 1.5 毫升离心管中。
充分混匀试管。