基于慢病毒载体的大鼠受精胚胎转导

取一个显微注射培养皿，中央含一滴胚胎培养液，并覆盖矿物油以防止蒸发。

将培养皿置于倒置显微镜下。

在显微镜下，将显微注射毛细管和持卵毛细管安装至显微操作器装置上。

将携带转基因的慢病毒载体悬液加入显微注射毛细管中。

然后，将受精的大鼠胚胎转移至培养基中。

使用持卵针通过施加负压固定胚胎。

在更高倍镜下，将显微注射毛细管插入胚胎的细胞外糖蛋白包膜——透明带，并将慢病毒悬液注入透明带下腔隙。

随后，将注射后的胚胎转移至培养皿中进行培养。

病毒进入胚胎，并将其含有转基因的基因组释放到细胞质中。

随后，其被逆转录为DNA，并整合到胚胎基因组中，从而引入外源基因。

转导后的胚胎现已准备好进行处理。

对单细胞期胚胎的透明带下进行慢病毒载体显微注射时，使用毛细管拉制仪制备带纤维的硼硅酸盐玻璃显微注射毛细管。每次更换加热丝或使用新的玻璃毛细管后，均需运行斜坡测试以设定最佳参数。

接下来，在生物安全超净工作台中，使用微量移液器吸头将约两微升新鲜解冻的慢病毒溶液加入每根显微注射毛细管中。在直径为60毫米的培养皿盖中央加入100微升M2培养基液滴，并用矿物油覆盖。将持卵毛细管和载有病毒的显微注射毛细管安装到显微操作仪上。

将显微注射皿置于倒置显微镜下，将15至20个单细胞期胚胎转移至显微注射皿中的M2液滴内。用持卵毛细管捕获一个胚胎，使用400倍放大倍数和玻璃毛细管将慢病毒溶液注射到透明带下方的卵周隙中，在病毒注射完成后将毛细管在透明带下方保持片刻。待所有胚胎注射完成后，用细小的移液管将已注射的胚胎转移回培养皿中，并将培养皿放回细胞培养孵箱，直至进行移植。