利用肝素亲和层析纯化病毒整合酶

从含有残余细菌核酸酶作为污染物的纯化病毒整合酶酶组分开始。

将样品上样至预先用低盐结合缓冲液平衡的肝素-Sepharose层析柱中。

当混合物流经色谱柱时，整合酶与肝素配体的结合力强于污染性核酸酶。

接下来，逐步增加流经层析柱的缓冲液中的盐浓度。

在低盐浓度下，弱结合的核酸酶首先洗脱，而强结合的整合酶则在较高盐浓度下 later 洗脱。

分别收集洗脱组分，以将污染的核酸酶与整合酶分离。

向每份组分中加入SDS-PAGE上样缓冲液，并加热以变性蛋白质。将样品上样至SDS-PAGE凝胶，进行电泳分离。

观察染色后的凝胶。

选择含有明显整合酶条带且无可见杂蛋白的组分，表明其具有明显的纯度。

为了对原型泡沫病毒整合酶进行肝素亲和层析分级，通过加入1.5倍体积的缓冲液C，将样品的氯化钠浓度降低至200毫摩尔。然后以0.5毫升/分钟的流速和1兆帕的最大压力限制，将稀释后的原型泡沫病毒整合酶样品上样至肝素Sepharose柱。洗涤柱子并收集梯度洗脱液及最终洗涤液后，通过8% SDS-PAGE分析上样液、穿流液、洗涤液和各组分。

然后通过考马斯亮蓝染色凝胶来评估各组分。原型泡沫病毒整合酶与污染性核酸酶对肝素 Sepharose 层析具有不同的亲和力。鉴定出似乎含有近乎纯化的原型泡沫病毒整合酶的肝素 Sepharose 组分，用于后续核酸酶活性检测。