从感染昆虫个体中分离与纯化病毒

取悬浮在含有螯合剂的缓冲液中的病毒感染昆虫虫体。

通过匀浆破碎昆虫组织，释放细胞内组分，包括病毒颗粒和活性金属离子。

螯合剂与金属离子结合，防止活性氧的形成，从而保护病毒颗粒免受氧化损伤。

通过超速离心沉淀病毒和不溶性碎片，然后弃去上清液。

加入含有盐和去污剂的缓冲液，然后通过反复吹打重悬沉淀。去污剂可溶解富含脂质的碎片，从而释放出相关的病毒颗粒。

离心以沉淀不溶性碎片。收集含有病毒颗粒的上清液。

过滤上清液以去除残留碎片，并收集含有病毒的滤液。

将滤液在低温水中透析，以去除多余的去垢剂和缓冲盐。

定期更换水，直至病毒颗粒沉淀。病毒即可用于后续实验。

将携带病毒的H. vitripennis整个虫体在含有0.02% DETCA的磷酸盐缓冲液中通过涡旋振荡进行匀浆，每次约10秒，直至无明显组织大块存在。通过超速离心提取病毒，条件为4 °C下22,000 × g离心16小时。

弃去上清液后，收集沉淀，并用五毫升含0.4%脱氧胆酸钠和4%聚乙二醇十六醚的10毫摩尔磷酸缓冲液溶解沉淀。为充分混匀，必要时将沉淀从管壁上刮下并研碎。在300 × g条件下离心15分钟。移除上清液，然后将溶液通过0.45微米滤膜，并将滤液收集至一个大容量收集管中。

将滤液转移至截留分子量为3.5千道尔顿的透析膜中，必要时可使用少量不含DETCA的10毫摩尔磷酸缓冲液。将透析膜置于盛有4摄氏度双蒸水的大烧杯中。每小时更换一次水，持续5至6小时，直至膜内形成白色沉淀。