报告基因携带型埃博拉病毒转录与复制能力病毒样颗粒的制备

从一个模拟埃博拉病毒基因组的微型基因组质粒开始，该质粒编码病毒结构蛋白、糖蛋白以及荧光素酶报告基因。

添加编码T7聚合酶、病毒核蛋白和病毒聚合酶组分的辅助质粒，这些组分对复制和转录至关重要。

向质粒中加入基于脂质的转染试剂，涡旋混匀，并孵育混合物以形成质粒-脂质复合物。

将该混合物加入人肾细胞中，轻轻混匀，并进行孵育。

脂质复合物与细胞融合。质粒进入细胞。

辅助质粒编码其相应的蛋白质。

随后，T7聚合酶将迷你基因组转录为病毒基因组RNA，该RNA会立即被核蛋白包裹。

病毒聚合酶复合物结合病毒基因组RNA，并将其转录为病毒mRNA。这些mRNA产生病毒结构蛋白和糖蛋白。

病毒蛋白组装形成含有荧光素酶报告基因的无致病性转录和复制能力病毒样颗粒（trVLPs）。

补充新鲜培养基以维持细胞活力并支持转录与复制 competent 病毒样颗粒（trVLP）的产生。

用生产TRVLPs所需的质粒转染细胞。在生物安全柜中，使用滤芯吸头将DNA加入离心管中。作为阴性对照，其中一个孔中省略编码病毒聚合酶L的质粒，可转染编码GFP的质粒以可视化转染效率。然后向DNA中每孔加入100 µL OptiMEM。涡旋混匀离心管并短暂离心。

接下来，向稀释后的 DNA 中加入 7.5 µL Transit LT1 转染试剂。轻轻涡旋混匀离心管，并在室温下孵育 15 分钟。15 分钟后，通过移液上下吹打轻柔混匀转染混合物，然后以逐滴加入的方式将 100 µL 转染复合物加入六孔板的每个孔中。

将转染复合物加入细胞后，轻轻前后及左右摇动培养板。切勿旋转摇动培养板，以免导致转染不均。操作完成后，将细胞放回培养箱继续培养。转染24小时后，移除细胞的上清液。