基于荧光素酶的检测法在人胚胎肾细胞中评估抗病毒化合物

从含有测试化合物系列稀释液的多孔板开始，以评估其抗病毒活性。

向每个孔中加入含有表达荧光素酶的重组麻疹病毒的人胚肾细胞悬液。

孵育以使细胞贴附至每个孔的底部。

在未添加待测化合物的对照孔中，病毒与细胞膜融合并将基因组释放到细胞质中。

病毒基因组指导病毒RNA和蛋白质的合成，同时表达报告蛋白荧光素酶。

在检测孔中，抗病毒化合物抑制病毒复制，从而减少荧光素酶的产生。

向每个孔中加入荧光素酶特异性底物，该底物与荧光素酶相互作用并发出荧光。

使用酶标仪测量每个孔中的发光强度。

与对照孔相比，检测孔中较低的发光信号表明病毒复制受到抑制。

随着化合物浓度的增加，发光信号逐渐降低，表明病毒复制受到剂量依赖性抑制。

从化合物稀释板中取一微升加入白色条形码组织培养板中。重复此过程两次，以创建三份测试板。然后向组织培养板中加入50微升培养基。现在，准备37.5毫升含补充剂的DMEM培养基中悬浮的HEK-293T细胞，浓度为每毫升60万个细胞。

取两支15毫升离心管，每管加入12.5毫升细胞悬液。用感染复数（MOI）为0.1的rMV2/Luc感染其中一管细胞。然后，将未感染的细胞和感染后的细胞分别加入各自的HIT化合物筛选板中。

每孔加入 50 微升细胞，将培养板在 37 摄氏度下孵育 24 小时。次日，向感染 rMV2/Luc 的细胞各孔中加入 50 微升萤火虫荧光素酶底物。向未感染的对照细胞中加入 50 微升基于荧光素酶的细胞活力检测试剂。