使用阿米巴原虫从混合病毒群中分离单一巨型病毒

首先将阿米巴原虫培养在含有抗菌剂的饥饿培养基中，以防止污染。阿米巴原虫可作为巨大病毒的易感宿主。

加入含有两种巨大病毒混合群体的稀释病毒悬液。

将培养皿放入袋中以防止培养基蒸发，并进行孵育。

病毒稀释增加了每个阿米巴原虫接触单一类型巨型病毒的可能性。

阿米巴吞噬病毒后，病毒在细胞内复制，导致感染的细胞变圆并脱落，产生细胞病变效应。

在光学显微镜下监测培养物，以确认细胞病变效应。

然后，将培养皿转移至倒置显微镜载物台上。

在倒置显微镜下，将微毛细管置于显微操作器上。微毛细管内含有生物相容性矿物油，用于控制细胞的吸取。

使用微毛细管轻柔吸取一个圆形的感染细胞，并将其释放到新鲜的阿米巴培养物中。孵育。

感染细胞内积累的病毒子代通过胞吐作用释放，并扩散感染邻近细胞，从而扩增单个巨大病毒群体。

用饥饿培养基在不同孔中对病毒样品进行系列稀释。在每个培养皿中加入100毫升混合接种物，接种2毫升浓度为1×10⁶的Vermamoeba vermiformis。

然后，将培养皿放入可密封的塑料袋中，置于30摄氏度环境中。感染后6小时，使用倒置光学显微镜观察培养皿，并每4至8小时检查一次细胞形态。抗菌处理用于细胞培养支持。

在培养皿中选择无真菌和细菌污染迹象、且可见因病毒感染导致的阿米巴细胞病变效应以及阿米巴细胞处于预裂解和变圆阶段的样本，以避免吸入病毒颗粒。设置配备有显微操作仪、手动控制压力装置、倒置显微镜、即插即用电机模块、相机和计算机模块的工作站。选择内径为20微米的微毛细管，以利于细胞在内部稳定定位并易于释放。

将夹持系统的操作角度在电机模块上固定为45度。进行双重安装，先安装夹持系统，然后安装微毛细管。聚焦于细胞。

为了克隆细胞，将含有两毫升感染阿米巴原虫的培养皿置于显微镜下。首先聚焦于细胞，然后聚焦于浸没在培养液中的微毛细管。选择一个圆形的单个细胞，并通过显微操作器将微毛细管移近该细胞。

通过手动压力控制对细胞施加轻柔的吸力，将其吸入微毛细管中。将单个细胞从第一个样本中移出，并释放到阿米巴细胞培养基中，随后在30摄氏度条件下进行孵育。需仔细控制压力，以确保能够吸取单个细胞，并通过观察单个细胞的释放情况来控制吸力操作。

使用倒置光学显微镜进行每日观察，以查看细胞形态并监测细胞病变效应的出现。