表达免疫刺激蛋白的重组麻疹病毒的制备

从含有重组麻疹病毒抗原组质粒和编码关键病毒蛋白的辅助质粒的脂质体悬浮液开始。

抗原组质粒包含麻疹病毒基因组的cDNA，经修饰后可在感染细胞中表达免疫刺激蛋白和荧光报告蛋白。

取含有抗生素的病毒生产细胞培养物，以防止污染。

将脂质体悬液加入培养物中并进行孵育。

脂质体与细胞膜融合以递送质粒。

宿主细胞的机制将抗原组cDNA转录为RNA，并将辅助质粒转录为mRNA，从而实现蛋白表达和病毒复制复合物的形成。该复合物可产生基因组RNA，进而促进病毒蛋白的表达。

基因组RNA与病毒蛋白组装生成重组病毒颗粒。

感染的细胞还表达荧光报告蛋白，可用于显微观察，并产生病毒编码的免疫刺激蛋白。

感染的细胞会形成多核合胞体，这是麻疹病毒细胞病变效应的典型特征。

使用荧光显微镜识别大型荧光合胞体，以确认成功拯救重组病毒。

为了从cDNA中拯救麻疹病毒，转染前24小时将麻疹病毒生产细胞均匀接种于6孔板中。

将200,000个细胞接种于每孔2毫升含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中，使细胞在转染时达到65%至75%的融合度。将5微克编码麻疹病毒抗原组的重组DNA与适当的质粒及荧光报告基因混合，总体积为200微升DMEM。

向混合物中加入 18.6 微升脂质体转染试剂，并立即轻弹管壁混匀。将转染混合物在室温下孵育 25 分钟。为转染麻疹病毒生产细胞，移除生长至 65% 至 75% 汇合度的 6 孔板中的培养基，每孔加入 1.8 毫升含 2% 胎牛血清和 50 微克/毫升卡那霉素的 DMEM 培养基。

然后将转染混合物逐滴加入每个孔中，并轻轻摇晃混匀。将细胞在37摄氏度和5%二氧化碳条件下孵育过夜。次日，用2毫升含2%胎牛血清和50微克/毫升卡那霉素的新鲜DMEM培养基替换原培养基，并在培养基因变酸而呈现黄色时重复更换。

每天使用显微镜观察细胞，检测报告基因表达及合胞体形成情况。当出现由20个或更多细胞组成的大合胞体，或细胞密度过高时，收获病毒。