治疗性病毒生产上皮细胞的制备与收获

从含有血清的培养基中培养的肾上皮细胞开始。

将该培养基替换为含有携带免疫调节基因的基因工程病毒的无血清培养基，用于治疗用途。

孵育细胞，使病毒能够结合到细胞表面受体上。

移除含有残留未结合病毒的上清液。

加入含新鲜血清的培养基以维持细胞存活，并进行培养。

孵育期间，病毒通过受体介导的内吞作用进入细胞，释放其基因组，该基因组进而产生病毒RNA。

病毒基因组进行复制，同时病毒RNA合成新的病毒蛋白。

病毒蛋白组装成新的病毒颗粒，并释放到周围培养基中。

这些子代病毒进入邻近细胞，引发感染并形成感染细胞簇。

轻轻刮下细胞单层，以收获产生治疗性病毒后代的细胞。

将悬浮液收集至离心管中，并于低温保存以备进一步分析。

为分析麻疹病毒复制动力学，于感染前一天，在12孔板中每孔接种100,000个Vero细胞，每孔加入1毫升含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基，每个关注的时间点至少设置两个孔作为技术重复。为感染细胞，移除原有培养基，更换为含有相应病毒量的300微升无血清培养基。于37 °C及5% CO₂条件下孵育至少2小时。

移除接种液，加入1毫升含10% FBS的DMEM，继续孵育。在感染后相应时间点，通过直接将细胞刮入培养基中来收获病毒子代。将每个孔中的内容物转移至单独的离心管中。

在液氮中速冻，然后于-80 °C保存，直至滴定；随后按照文中的描述进行操作。