用于基因转移的逆转录病毒颗粒的制备

从在营养丰富的培养基中培养的人类肾上皮细胞开始。

更换为低血清培养基，以减少血清干扰并提高转染效率。

将转染混合物逐滴加入细胞中。

该混合物包含携带目的基因的逆转录病毒DNA构建体、提供必需病毒蛋白的包装质粒，以及聚乙烯亚胺（polyethylenimine），后者可与质粒DNA形成复合物，从而促进转染。

孵育细胞，以促进DNA复合物的摄取。

更换培养基以去除残留的转染试剂。

在细胞内，质粒DNA进入细胞核，在此处指导病毒蛋白的合成以及携带目的基因的病毒RNA的生成。

这些组分组装并出芽进入培养基，形成重组逆转录病毒颗粒。

收集含有病毒的培养基，并短暂置于低温下保存，以维持病毒的稳定性。

离心以沉淀细胞碎片。

将病毒上清液分装，用液氮速冻，然后在低温下保存，以用于后续的基因转移实验。

在直径16厘米的培养皿中，将Bosc23细胞的单细胞悬液接种于18毫升添加10%胎牛血清的DMEM培养基中，培养约24小时，直至细胞融合度达到80%。然后将MSCV逆转录病毒载体、PCL-Eco包装载体、聚乙烯亚胺和无抗生素的低血清培养基混合，在室温下于生物安全柜中孵育20分钟。随后，小心地将Bosc23细胞培养基更换为16毫升预热至37摄氏度的含2%胎牛血清的DMEM培养基。接着，将逆转录病毒混合液逐滴加入Bosc23细胞中，于37摄氏度孵育4小时。

孵育结束后，吸除 Bosc23 细胞培养基，加入 18 毫升预热的含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基。将细胞在 37 °C 下孵育 48 小时。使用 25 毫升血清移液管将含有 Bosc23 病毒的培养基转移至 50 毫升锥形管中。将锥形管置于 4 °C 保存。随后向 Bosc23 细胞中加入 18 毫升预热的含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基，并继续培养细胞 24 小时。

在 4 °C 条件下以 1,500 × g 离心病毒上清液 10 分钟。然后将病毒分装，用液氮速冻，并于 -80 °C 保存。