基于荧光素酶的病毒定量样品制备

从含有被基因改造病毒感染的上皮细胞的多孔板开始。

该病毒携带编码荧光素酶的转基因。

取白色壁多孔板中的上皮细胞新鲜培养物。

将含有未知浓度病毒的上清液转移至白色器壁的孔中。

同时，加入已知浓度的病毒作为标准品。

离心培养板以促进病毒颗粒与宿主细胞表面受体之间的紧密接触，并进行孵育。

病毒进入宿主细胞并递送其负链RNA基因组。

随后，病毒RNA聚合酶将基因组转录为mRNA。

利用宿主的细胞机制，mRNA 被翻译成病毒蛋白，包括荧光素酶。

宿主细胞内积累的荧光素酶量随病毒浓度的增加而增加。

样品已准备好，可使用荧光素酶检测法进一步测定病毒浓度。

在无血清 DMEM 中制备 VSV-Delta-51 的标准曲线，使其转染至 Vero 细胞后的最终浓度（每毫升空斑形成单位）如下所示。每块 Vero 细胞培养板各浓度需准备 50 微升，另加 10% 的额外量。标准曲线可转移至 96 孔深孔板中。接着，在光学显微镜下检查透明底 96 孔板中的 Vero 细胞，确认单层细胞融合度至少达到 95%。使用 12 通道多通道移液器，将 25 微升样品上清液转移至白色壁板中接种的 Vero 细胞中，同时将标准曲线各稀释度的 25 微升分别加入指定的两列 Vero 细胞中。室温下以 430 × g 离心 5 分钟。然后将培养板置于 37 °C、含 5% 二氧化碳的湿润培养箱中孵育 5 小时。