工程化病毒样颗粒的制备 大肠杆菌

取一支含有基因工程改造的 E. coli 细胞的起始培养物，该细胞携带受乳糖操纵子调控的 T7 聚合酶基因以及一个表达质粒。

该质粒携带一个编码源自噬菌体Qβ的外壳蛋白的基因。

该基因受T7启动子和lac操纵子调控。

将菌液转移至含有培养基的烧瓶中。

振荡培养以促进细菌生长。

加入异乳糖的合成类似物，使其失活乳糖阻遏蛋白，从而启动T7聚合酶的表达。

T7聚合酶随后结合至质粒上的T7启动子，并转录衣壳蛋白基因，该基因经翻译后产生衣壳蛋白。

这些衣壳蛋白可自组装成病毒样颗粒（VLPs），形成无感染性的支架结构。

将培养物转移至离心管中。

离心以收集细胞沉淀。

弃去上清液，并将沉淀转移至离心管中。

含有细胞内病毒样颗粒（VLPs）的细胞沉淀已准备好进行纯化。

在开始表达Q-β噬菌体的实验操作之前，使用1:1的次氯酸钠-乙醇溶液擦拭实验台面。在无菌环境下，通过将大肠杆菌E. coli BL21的单菌落接种至SOB培养基中，制备两份3 mL的种子培养物。将培养物置于37 °C、0%相对湿度的环境中，以250 rpm振荡培养过夜。次日，从摇床中取出两份3 mL种子培养物，在无菌条件下将每份种子培养物分别倒入装有1 L新鲜SOB培养基的2 L带挡板锥形瓶中。将两瓶接种后的培养物置于37 °C、0%相对湿度的环境中，以250 rpm振荡培养。继续培养细菌，直至其在600 nm处的光密度（OD600）达到0.9至1.0，此过程通常需要约5小时。当培养物达到目标OD600值时，使用P1000移液器向每个锥形瓶中加入1 mL的1 M IPTG，以诱导蛋白表达。随后将锥形瓶继续留在摇床中，在37 °C环境中振荡过夜。

次日早晨，从摇床中取出锥形瓶，将每瓶内容物转移至1 L的瓶子中，在4 °C条件下以20,621 × g离心1小时，以收集细胞。离心结束后，将上清液倒入含有约5 mL次氯酸钠的烧瓶中以灭活细菌，然后弃去上清液。

收集细胞沉淀时，使用刮勺从离心瓶底部刮取细胞沉淀，并将其转移至一个50毫升离心管中。