安全的病毒样本制备用于透射电子显微镜观察

在生物安全柜内，将高传染性病毒悬液吸入含有透射电镜载网的胶囊中。

水平孵育，以帮助病毒在网格上均匀附着。

去除含有未结合病毒的悬液，然后加入固定剂以交联蛋白质，从而保持病毒结构并降低其感染性。

孵育后，洗涤以去除残留的固定剂。

加入电子致密的负染剂，使其结合到病毒周围的载网上，从而在成像过程中增强对比度。

取下移液器，用滤纸轻触网格边缘以吸除多余染液。

将胶囊放入含有经四氧化锇浸泡的滤纸的离心管中，然后密封管子并进行蒸气固定孵育。

四氧化锇可稳定脂质膜结构，提高成像对比度，并完全灭活病毒，从而实现生物安全 containment 区域外的安全转移。

在透射电子显微镜设施内，冲洗载网，使其自然晾干，然后储存以备成像。

该方法可确保更安全地处理病毒样本，并简化标本制备过程。

首先，将胶囊连接到移液器上。吸取 40 µL 病毒悬液进入胶囊中。将移液器侧放，使载网水平朝向，静置 10 分钟。接着，拿起移液器，将病毒溶液排入废液容器中。吸取 40 µL 的 2% 戊二醛固定液进入胶囊中。将移液器侧放静置 20 分钟。此后，排出固定液，并吸取 40 µL 去离子水进入胶囊，以洗去残留固定液。重复此洗涤步骤共三次。

接下来，将40 µL的1%醋酸铀酰或1%磷钨酸钾吸入胶囊中，静置30秒。然后，将胶囊从移液器上取下。

用滤纸接触载网边缘以吸干液体。将滤纸转移至15毫升离心管中。接着，将滤纸浸入1%四氧化锇溶液中。

将打开盖子的胶囊放入管中。密封管子一小时，以使四氧化锇蒸气充分渗透。之后，对管子进行去污处理，并将其从生物安全 containment 区域转移至 BSL-2 电镜（EM）设施。

将胶囊从离心管中取出，然后安装到移液器上。吸取40 µL去离子水进入胶囊，随后将水排入废液容器中。重复此水洗步骤三次。

接下来，将胶囊从移液器上取下。用滤纸轻触网格边缘，吸干液体。待网格自然晾干后，将其存放在网格盒中，直至准备进行透射电子显微镜（TEM）成像。