体外重组与纯化病毒核衣壳样颗粒

从一种重组表达的、无RNA的病毒特异性核蛋白-磷蛋白复合物开始。

将该复合物与病毒特异性的RNA寡核苷酸共同孵育，以启动核衣壳样颗粒的组装。

在组装过程中，病毒RNA取代了磷酸化蛋白片段，使核蛋白能够包裹RNA，形成类似核衣壳的颗粒。

离心样品以去除任何沉淀物。

取一支预先平衡的装有孔状树脂的凝胶过滤层析柱，将上清液上样至柱中。

当样品流经色谱柱时，较大的核衣壳复合物被排除在孔隙之外，首先洗脱出来。

中等大小的蛋白质复合物和小分子RNA进入孔隙并较晚洗脱。

监测洗脱液的吸光度，以生成具有明显峰形的洗脱曲线。

第一个峰显示组装好的核衣壳，随后是较小的蛋白质复合物和游离RNA。

收集对应于核衣壳峰的组分，用于验证和进一步分析。

进行病毒特异性核衣壳组装时，将纯化的 N0P 复合物与 RNA 寡核苷酸按 1:1.5 的分子比例混合，并在室温下孵育一小时。用缓冲液 E 预平衡小规模纯化凝胶过滤柱，并通过离心去除任何沉淀物。

将上清液上样至尺寸排阻色谱柱中。通过比较蛋白-RNA组装样品与仅含蛋白的对照样品的尺寸排阻色谱图，并结合核酸纯度比值，确定哪些峰对应组装完成的N-RNA、N0P以及游离RNA。为组装N-RNA复合物，收集所有N-RNA峰对应的组分，进行RNA提取，并运行尿素-PAGE凝胶电泳，以再次确认特定RNA的长度。