通过透射电子显微镜观察戊型肝炎病毒纳米颗粒

从放置在玻璃载片上的碳膜载网开始，用于透射电子显微镜（TEM）观察。

将载网放入电离室中，施加辉光放电，使碳膜表面具有亲水性，以实现样品的均匀铺展。

取出载玻片，用镊子夹住载网，并将戊型肝炎病毒（HEV）纳米颗粒悬液滴加到载网上。

这些纳米颗粒由重组的HEV衣壳蛋白构成，不含核酸和辅助病毒蛋白。

孵育以使纳米颗粒吸附到载网表面，然后用滤纸吸除多余的悬液。

用去离子水洗涤载网，以去除未吸附的纳米颗粒，然后再次用滤纸吸干。

加入醋酸铀染色液并短暂孵育。

醋酸铀在纳米颗粒周围形成电子致密的背景，从而在透射电子显微镜成像过程中增强对比度。

吸去多余的染色液，并将载网放入干燥除湿室中干燥。

在透射电子显微镜下，HEV 纳米颗粒呈现为均匀、中空的二十面体结构，且缺乏病毒核酸。

用 10 毫摩尔 MES（pH 6.2）将 HEV 纳米颗粒样品稀释至 0.5 至 2 毫克/毫升，用于透射电子显微镜（TEM）成像。用 40 毫安电离放电处理碳膜载网 30 秒，以产生亲水性碳表面。载网的亲水性碳表面在电离放电处理后仅可维持 30 分钟。电离后，用镊子夹持载网，并向载网上加入 2 微升 HEV 纳米颗粒样品。

15至30秒后，用滤纸吸去网格上的液体。立即用双蒸水洗涤网格，并再次用滤纸吸干。立即向网格上加入2 µL的2%醋酸铀酰溶液。15秒后，用滤纸吸去液体。将样品网格置于电子除湿干燥柜中过夜，以干燥样品。

根据样品的不同，可能需要采用冷冻电子显微镜（cryo-EM）进行结构的观察与表征。将载网放入透射电子显微镜（TEM）中，在10至80K的放大倍数下进行成像。由于缺乏病毒RNA，戊型肝炎病毒纳米颗粒在TEM中呈现为空心的二十面体蛋白结构，直径约为27纳米。