Name: 分离果蝇睾丸 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 13 s
Description: 学习使用解剖针和冰冷PBS从0至3日龄雄性黑腹果蝇中快速分离睾丸的技术。该方法可在显微镜下高效获取完整睾丸组织，适用于后续的RNA提取、蛋白质分离及免疫荧光染色等分子生物学分析。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

作者感谢 Vasia Vagin 将该技术引入我们的实验室。

<ol>
	<li>制备带有黑色背景的玻璃显微镜载玻片：将20#白纸裁剪成与显微镜载玻片相同尺寸。使用永久性记号笔（例如 Sharpie）将纸的一面涂成黑色。在黑色面涂上白胶（Elmer's），然后将纸粘贴到载玻片上。该载玻片可重复使用。使用¾英寸标签胶带（Fisherbrand）将载玻片（玻璃面朝上）固定在 CO2 果蝇操作垫上，以固定其位置。</li>
	<li>收集0至3日龄的雄性果蝇。</li>
	<li>准备一桶冰、磷酸盐缓冲液（PBS）和解剖针。</li>
	<li>使用CO2气流麻醉50–100只果蝇，并将其从培养瓶或小管转移至显微镜载玻片附近的果蝇操作垫上。</li>
	<li>用移液器吸取约50 μl冰浴PBS，滴在载玻片中央。</li>
	<li>用解剖针轻轻挑起一只雄性果蝇——先将解剖针浸入PBS中，然后轻轻触碰果蝇腹面（即靠近翅膀处），再将其放入PBS液滴中。</li>
	<li>将一根解剖针置于果蝇胸部与腹部之间中部位置，用力下压。另一根解剖针插入第六（A6）与第七（A7）腹节之间（从底部数第二和第三条条纹处），将腹部从胸部拉离。</li>
	<li>将睾丸与其他器官（尤其是肠道）分离。特别是在white突变体中，睾丸与肠道外观相似。关键区别在于：睾丸总是成对出现；每侧睾丸具有螺旋状结构，且颜色比肠道更白。</li>
	<li>将分离出的睾丸保存在装有冰浴PBS的聚丙烯微量离心管中。</li>
</ol>
代表性结果：
<img src="/files/ftp_upload/2641/2641fig1.jpg" alt="静态平衡图；DNA结构；教学示意图。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 
图1. 雄性生殖系统的背侧视图，来自 flybase.org/reports/FBim0000074.html。Flybase 来源说明：“改编自 Miller (1950) 第508页图38A。A. Miller. 黑腹果蝇成虫的内部解剖与组织学。载于 M. Demerec 编，《果蝇生物学》，第6章，第420–534页。冷泉港实验室出版社，影印版，1994年。©1994 冷泉港实验室出版社版权所有。经冷泉港实验室出版社（CSHL Press）许可使用。详见 <a href="http://www.cshlpress.com">http://www.cshlpress.com</a>。”

<ol><li>Singh, S. R., Hou, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistological+Techniques+for+Studying+the+Drosophila+Male+Germline+Stem+Cell%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Immunohistological Techniques for Studying the Drosophila Male Germline Stem Cell.</a> Methods Mol Biol. 450, 45-59 (2008).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

我们提供一种从成年雄性黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）中分离睾丸的实验方案。由于该技术需要双手协调操作，熟练程度只能通过练习获得。

<table><tbody><tr><td>解剖针</td><td>工具</td><td>Fisher Scientific</td><td>S17346</td><td></td></tr><tr><td>普通载玻片</td><td>工具</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-553</td><td></td></tr><tr><td>显微镜光源</td><td>工具</td><td>Schott AG</td><td>KO-1500</td><td></td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 垫板</td><td>工具</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-172</td><td></td></tr><tr><td>台式 Flowbuddy 完整系统</td><td>工具</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-122WCU</td><td></td></tr><tr><td>气泡加湿器</td><td>工具</td><td>Salter Labs</td><td>7100</td><td></td></tr><tr><td>球状填充针</td><td>工具</td><td>Genesee Scientific</td><td>54-119</td><td></td></tr><tr><td>&amp;#190;&amp;#8221; 标签胶带</td><td>耗材</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-901-5B</td><td></td></tr></tbody></table>

drosophila melanogaster 睾丸的分离

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Drosophila melanogaster 的睾丸是研究干细胞维持与分化、减数分裂以及体细胞-生殖细胞相互作用的重要模型。通常从羽化后0-3天的成年雄性果蝇中分离睾丸。野生型果蝇的睾丸因其呈黄色而易于与其他组织区分，但实验室常用遗传背景的 white 突变体果蝇的睾丸在形状和颜色上均与果蝇肠道相似。在具有黑色背景的玻璃显微镜载片上进行解剖可显著提高睾丸的辨识度。使用解剖针从果蝇体内取出睾丸。与使用镊子解剖睾丸的方法相比，本方法速度更快，熟练操作者每小时可解剖200-300只野生型果蝇，获得400-600个睾丸。而 white 突变体果蝇或睾丸尺寸较小的突变体果蝇的睾丸较难解剖，通常每小时可获得200-400个睾丸。

Drosophila melanogaster 的睾丸可通过解剖针从成年雄性个体中快速高效地分离。经过练习，可在一至两天内分离出足量的睾丸组织，用于高通量测序或更传统的分子生物学方法对 DNA 或 RNA 进行分析，或用于基于抗体或酶学检测的蛋白质分析。

Drosophila melanogaster 睾丸的分离

黑腹果蝇的睾丸为研究干细胞维持与分化、减数分裂以及体细胞-生殖细胞相互作用等过程提供了重要的模型系统。

本实验的总体目标是从零到三天大的雄性黑腹果蝇中分离睾丸。具体操作是将雄性果蝇麻醉后，在显微镜下利用两枚解剖针，在一滴冰冷的PBS中进行解剖：用解剖针将果蝇的腹部从胸部拉开。最后将睾丸从其他组织中仔细分离，并收集用于多种分析技术，如免疫荧光、染色，或总RNA和蛋白质提取。该方法的可视化演示至关重要，因为分离出的睾丸较难辨认，容易与肠道组织混淆。本实验操作将由我实验室的技术员 shemei ma 进行示范。首先准备一桶冰、解剖针以及约100毫升磷酸盐缓冲液。将PBS置于冰桶中预冷。通过将白色20磅纸裁剪至适合载玻片的大小，制作具有黑色背景的显微镜载玻片。然后将其中一侧涂成黑色。使用永久性记号笔将纸张固定在载玻片上，并将载玻片固定到 CO2 垫上。在解剖显微镜下，用一股 CO2 气流使一瓶 0 至 3 日龄的果蝇麻醉，并将其倾倒至垫上。在固定好的显微镜载玻片附近，通过其特有的深色交配钩识别雄性果蝇，并挑选出50至100只。用移液器吸取约50微升冰冷的PBS，滴加到显微镜载玻片中央，形成液滴。将解剖针浸入PBS液滴中，轻轻触碰雄性果蝇的腹面，使其粘附在针上，从而拾取果蝇。将果蝇置于 PBS 液滴中，用一根针牢固地压住果蝇胸部与腹部之间的位置。将另一根针压在第六和第七腹节之间，然后将腹部从胸部拉开。将睾丸与其他器官（尤其是肠道）分离，肠道外观与睾丸相似，需仔细区分以帮助辨认睾丸。请注意，睾丸总是成对出现，具有特征性的螺旋形状，且颜色比肠道组织更白。将睾丸收集到含有冰冷 PBS 的微量离心管中，并置于冰上保存，可在冰上保存数小时。一旦熟练掌握，按照本方法一只果蝇的解剖可在一分钟内完成。还可以进行其他方法，例如小干扰RNA或微小RNA的深度测序，以回答更多问题，例如：在特定突变果蝇中，RNA的组成如何发生变化？

isolation-of-drosophila-melanogaster-testes

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

分离果蝇睾丸

本视频介绍了从雄性果蝇中解剖副腺的方法，并展示了一个将分离的腺体解离为单细胞悬液的示例。...

Drosophila 雄性附属腺解剖：一种分离次级细胞的方法

黑腹果蝇 卵巢解剖：一种技术方法 离体 组织制备

本视频介绍了Drosophila环腺，这是一种重要的内分泌结构，参与蜕皮类固醇及其他激素的生物合成与分泌。本实验方案展示了环腺的解剖、固定及免疫染色操作过程。...

幼虫环腺解剖：从Drosophila中分离发育性内分泌器官

特异性分离中期至晚期的Drosophila卵泡在多种研究中具有重要用途。这类卵泡可在体外培养中发育，从而能够将遗传学和/或药理学操作与in...

中期至晚期特定阶段的实用性 果蝇 卵泡分离

本文描述了分离和制备用于相差显微镜和荧光显微镜成像的活体及固定Drosophila睾丸样品的方法。...

精子发生过程的细胞学分析：Drosophila 精巢的活体与固定制备

本方案描述了完整睾丸及生殖系囊泡的分离与培养方法 黑腹果蝇 蛹。该方法可用于精细胞发生的显微观察...

离体 培养 果蝇 蛹期睾丸与单个雄性生殖细胞囊：解剖、成像及药物处理

本文介绍了一种从黑腹果蝇（Drosophila）雄性附属腺中分离并分选特定细胞群体（次级细胞）以进行RNA测序和RT-qPCR的实验方案。通过解剖、蛋白酶消化和机械分散等多步骤解离处理后，利用流式细胞术对表达GFP的次级细胞进行分选纯化，从而实现细胞的分离。...

基于FACS的从副细胞中分离RNA的实验方案 果蝇 雄性附属腺体

血脑屏障的完整性对神经系统功能至关重要。Drosophila melanogaster 的血脑屏障在胚胎发育晚期由胶质细胞形成。本方案描述了检测 D. melanogaster...

Drosophila melanogaster 中血脑屏障完整性的检测方法

本实验方案的目的是通过活细胞和固定细胞显微镜技术，对完整组织中的细胞分裂进行分析 黑腹果蝇 减数分裂的精母细胞。该方案展示了如何从完整的睾丸中分离出完整且未受损的睾丸组织 果蝇...

样品制备 果蝇 用于活体完整组织中细胞分裂分析的幼虫与蛹期睾丸

我们在此介绍一种改进的全胚制备及免疫染色方案 果蝇...

整体免疫染色 果蝇 用于大精母细胞三维共聚焦分析的睾丸组织

该方案描述了一种对单核苷酸多态性敏感的荧光原位杂交（SNP-FISH）方法，用于区分源自黑腹果蝇（Drosophila...

单核苷酸多态性敏感的FISH检测法用于果蝇（Drosophila melanogaster）位点特异性核糖体RNA转录的检测

学习使用解剖针和冰冷PBS从0至3日龄雄性黑腹果蝇中快速分离睾丸的技术。该方法可在显微镜下高效获取完整睾丸组织，适用于后续的RNA提取、蛋白质分离及免疫荧光染色等分子生物学分析。

Drosophila melanogaster 睾丸的分离

探索更多视频