盲肠结扎穿刺过程
2011年5月7日
作为一个有价值的工具，为研究人类败血症盲肠结扎穿刺的小鼠模型。
您好，我是 Miguel Toscano，来自天普大学微生物学和血液学系 Dena 博士的实验室。今天，我们将向您展示如何在 C 57 Black Seas Mouse 品系中设置 iCal 指控和穿刺模型。我们在实验室中使用这个模型来模拟人类脓毒症。
基本上，该模型包括对血清进行穿刺，允许粪便物质释放到腹膜腔中以产生多种微生物败血症，从而产生加剧的免疫反应。在这个模型中，许多器官和不同的细胞类型受到不可逆的损伤。这最终会导致动物死亡。
所以让我们开始吧。麻醉小鼠。第一步是通过腹膜内注射麻醉动物。
酮胺和甲苯噻嗪的一比一混合物。为了避免被老鼠咬伤，为了不伤到他，我们必须用一只手从老鼠的尾巴上抓住。用另一只手，我们向后压在地板上。
然后我们可以从后脑勺抓住老鼠，然后将动物仰面翻转以露出腹部。使用 29 号胰岛素注射器，我们在腹膜腔中注射 20 至 30 微升麻醉剂。准备鼠标进行手术，抓住鼠标的背部，通过按下鼠标的尾巴和/或腿来剃掉它的腹部。
我们检查小鼠对疼痛不敏感，然后对腹部进行消毒。首先用 Betadine 溶液擦洗，然后用异丙醇湿巾擦拭至少一分钟。练习剖腹手术 为了练习剖腹手术，我们用镊子提起腹部中间的皮肤，并做一个长约一厘米的小切口。
然后提起会阴并练习另一个小切口以暴露腹膜腔。使用弯曲的镊子，握住腹膜。通过腹膜识别并暴露盲肠。
将其放在腹部。现在是结扎的时刻。这是一个重要因素。
为了确定模型的严重性，我们可以调节程序的严重性。通过结扎的延长，小鼠将出现较轻的败血症。如果结扎在靠近盲肠末端的地方进行，如果在中间进行中度败血症，如果在靠近回盲瓣的地方进行严重败血症，则手术的严重程度将反映在死亡率的百分比上。
切勿结扎回盲部瓣膜。现在用双结的丝缝合线进行结扎，使其紧固，使穿刺握住盲肠，小心地在靠近结扎部位的地方穿刺，然后在靠近盲肠末端的地方再穿刺一次。后鼻膜很柔软，很容易穿孔。
使用不同粗细的针并制作一个或两个穿孔，我们还可以调节模型的严重性。此处显示的单次或双重穿刺方法是经典贯穿和贯穿后穿刺的替代技术。使用单次或双重穿刺方法的优点是可以更好地控制他们寻找 em 时挤出的粪便量被挤压。
用双指握住盲肠，轻轻挤出盲肠，以提取非常少量的粪便。关闭剖腹手术，然后提起腹膜并小心地将盲肠放回原处。在腹膜腔中。
要非常小心，避免意外刺破盲肠 使用镊子时，建议使用更大的镊子。现在是关闭腹膜腔的时候了。使用真丝缝合线，确保它闭合得非常好非常重要。
我们从伤口的一侧开始打结。通过将真丝穿过前一个穿刺的环下，继续缝合直到另一侧。要闭合皮肤，我们可以使用 Mitchell 伤口夹或反射夹，使用正确的工具来闭合夹子。
根据需要放置任意数量的夹子以确保伤口闭合。通过皮下注射 1 毫升预温盐水溶液来复苏小鼠。使用 25 号针头，这种液体复苏措施将诱导脓毒症的高动力期，完成手术。
将鼠标放在红外加热灯下，或者放在加热垫上，直到鼠标从麻醉中恢复过来。在笼子的地板上提供食物和水，并每 8 到 12 小时监督动物是否有疾病迹象。皮下注射丁丙诺啡用于术后镇痛。
另一种可以使用的镇痛药是 T.曲马多。败血症的体征、败血症的症状是发烧、嗜睡、腹腔、勃起、腹泻、蜷缩和不适。病得很重的动物表现出体温严重下降，它们几乎不动以避免痛苦。
他们应该在这个阶段被安乐死 H.So 这就是我们执行镰状结扎和准时模型的方式。希望您喜欢此程序的演示，并发现它对您的研究非常有用，然后再开始动物研究。我们强烈建议您使用旧的或未使用的大脑进行训练，以便通过修改结扎的长度、针头的粗细和穿刺的次数来确定实验的适当严重程度。
说了这么多，再见。
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概述
本文讨论了盲肠结扎和穿刺的小鼠模型，该模型用于研究人类败血症。该模型通过将粪便物质引入腹腔，模拟多菌种败血症，导致夸张的免疫反应和潜在的器官损伤。
关键研究组成部分
科学领域
- 微生物学
- 免疫学
- 动物模型
背景
- 败血症是由感染引起的严重医疗状况。
- 动物模型对于理解败血症的机制至关重要。
- 盲肠结扎和穿刺模型有效地模拟了人类败血症。
- 该模型允许研究免疫反应和器官损伤。
研究目的
- 展示盲肠结扎和穿刺模型的设置。
- 强调该模型在败血症研究中的相关性。
- 提供对该模型引发的免疫反应的洞察。
使用的方法
- 使用C57BL/6小鼠作为模型。
- 穿刺盲肠释放粪便物质。
- 监测免疫反应和器官损伤。
- 评估手术后动物的存活率。
主要结果
- 该模型成功诱导多菌种败血症。
- 在小鼠中观察到显著的免疫反应。
- 发现器官损伤，导致潜在的死亡率。
- 该模型为败血症研究提供了宝贵的数据。
结论
- 盲肠结扎和穿刺模型是研究败血症的有价值工具。
- 它允许研究人员研究免疫反应和器官衰竭。
- 进一步的研究可以增强对败血症机制的理解。
常见问题
Executive Industry Relevance
The cecal ligation and puncture (CLP) model provides a reproducible, polymicrobial sepsis model that mirrors human pathophysiology, enabling target validation and mechanistic de-risking in early discovery. By reproducing both hyperdynamic and hypodynamic phases, it supports predictive confidence in therapeutic screening and translational biomarker identification. This model aids in assessing drug efficacy across disease stages, reducing late-stage failure risk in sepsis-related programs.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of immunological and physiological status across sepsis phases to validate therapeutic hypotheses.
- Operational Value: Supports functional target validation by modeling cytokine profiles and lymphocyte apoptosis relevant to human sepsis.
- Scientific Value: Facilitates pathway clarification through controlled induction of polymicrobial infection and organ damage readouts.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates quantifiable immune response and organ dysfunction metrics for assay standardization.
- Operational Value: Provides reproducible survival and physiological readouts enabling reliable compound evaluation.
- Scientific Value: Allows modulation of sepsis severity via ligation length, puncture number, and needle thickness for dose-response screening.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Models disease-relevant immune depression and nocosomial infection risk for translational biomarker alignment.
- Operational Value: Supports preclinical continuity by replicating clinical sepsis progression from hyperdynamic to hypodynamic phases.
- Scientific Value: Enables risk-adjusted advancement decisions through measurable outcomes like body temperature drop and lethargy.
Pipeline & Workflow Integration
The CLP model fits within the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing, particularly for immunomodulatory agents.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing by modeling systemic inflammatory response and immunosuppression phases.
- Screening: Delivers quantitative outputs such as cytokine levels, organ injury markers, and survival rates for compound comparison.
- Analytics: Enables statistical analysis of time-to-event and physiological parameters to assess treatment effects.
- Translational Research: Connects to preclinical validation via replicated human sepsis cytokine profiles and organ failure patterns.
- Enterprise Reuse: Serves as a reusable platform for sepsis mechanism probing and therapeutic screening across multiple campaigns.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in target validation through phase-specific pathophysiological modeling.
- Operational Value: Standardization via controlled severity modulation and postoperative monitoring protocols.
- Strategic Value: Improved go/no-go decisions by capturing stage-dependent drug effects in sepsis.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization based on model reproducibility and translational fidelity.
Implementation Considerations
- Requires expertise in aseptic surgical technique and rodent anesthesia.
- Dependent on instrumentation for ligation, puncture, and postoperative monitoring.
- Necessitates cross-team standardization of severity scoring and resuscitation protocols.
- Adaptation considerations include mouse strain, sex, and baseline health status.
- Practical limitations include variability in fecal extrusion and model mortality rates.
