腔内中东大脑中动脉闭塞（MCAO）缺血性中风模型在小鼠体内的激光多普勒血流指导

在这篇视频文章中，我们介绍了一种称为大脑中动脉闭塞或 MCAO 的缺血性中风的 murn 模型。在 coi 闭塞 MCA 的原始方法中，将钝缝线穿过颈总动脉以闭塞大脑中动脉。这种方法导致颈总动脉永久闭塞。

longa 的方法学修改允许通过颈外动脉进入大脑中动脉。该方法保留了颈总动脉的功能及其远端循环 在实验性缺血性中风模型中。大鼠和小鼠的腔内细丝中动脉闭塞模型是自首次在大鼠中描述以来最常用的模型之一，目前已经发表了初始模型的几种修改，只要修改是最突出的变体。

该模型侵入性较小，易于以受控方式进行永久性和短暂性缺血。腔内细丝大脑中动脉闭塞模型涉及将单丝插入颈内动脉并推进它，直到它阻止血液流向大脑中动脉。该模型提供可重复的中间条状动脉区域梗死，并允许在缝线缩回后进行再灌注。

梗塞的大小似乎受该技术中许多特定因素的影响，例如缝合线直径、缝合线的硅胶或多元醇赖氨酸涂层或细丝本身的插入长度。在本视频中，我们将展示如何逐步执行此模型，以及如何避免使用此方法的许多潜在陷阱和缺点。7.0 单丝尼龙缝合线将用于 MCA 闭塞。

尼龙缝合线的末端应因靠近热源而变钝。钝端应笔直光滑，长度约为 1 至 2 毫米。钝化末端后，应将缝合线剪成大约 11 至 13 毫米的总长度。

将缝合线的钝尖端浸入硅胶中，直到末端 3 到 4 毫米被涂覆并晾干。缝合准备的所有步骤都应在无菌条件下进行。称重小鼠后，在诱导室中用 4% isof 氟诱导麻醉。

将小鼠俯卧在位于热毯上的纱布垫上。为了保持 37 度的核心体温，手术过程中通过面罩维持麻醉。剃光头用酒精、Betadine 清洁，然后再次用酒精清洁。

在皮肤上做一个 1 厘米的切口，以暴露 bgma 后 1 毫米和外侧 5 毫米的颅骨。垂直于右顶颅表面贴上柔性微尖端，以监测血流。在 MCA 地区通过激光多普勒血流图像。

将动物恢复到仰卧位，用剪刀在柄和下巴之间做一个中线颈部切口。成对的下颌下腺被钝化，以暴露底层结构、二胃肌、胸骨踝乳突肌和气管形式。一个三角形缩回这些结构并进一步解剖，揭示颈总动脉、迷走神经和颈内静脉 cran 颈总动脉分叉为颈外动脉和颈内动脉。

枕动脉也可以从分叉区域开始观察。在 COE 的方法中，近端颈总动脉与迷走神经被小心地分离和隔离。在颈总动脉周围准备三条松散的领缝线。

必须特别注意，以免迷走神经被 A 缝合线夹住。识别并分离颈外动脉。然后将其烧灼 2 到 3 毫米，蒸馏至分叉处。

总动脉上最近端的领缝线被收紧以永久阻塞血流。通过从基线皮质灌注值下降约 50% 来验证血流阻塞缝合的自由端被修剪。在颈总动脉分叉处之前放置一个血管夹，以避免逆行血流。

接下来，用微型剪刀在血管夹和结扎线之间进行动脉作。这允许将热钝化的缝合线引入颈总动脉并推进直至到达血管夹。轻轻收紧剩余的两条松散的项圈缝合线，以避免通过颈总动脉回流渗漏。

取出血管夹，将钝化的缝合线轻轻推进到颈内动脉中。在多普勒读数上感觉到轻微阻力之前，结果比基线下降了大约 80%。两条领缝线被牢固地收紧以避免逆行出血。

现在可以让鼠标处于缺血状态一段适当的时间。为了模拟再灌注，闭塞缝合线在适当的间隔后撤出。多普勒读数的跳跃表明侧支血流已恢复。

合线完全撤回，两条领缝线完全收紧并采用长方法修剪。可以使用不同的途径来闭塞大脑中动脉。首先，必须识别、分离和尽可能远端烧灼颈外动脉，留出足够的长度进行缝合插入。

然后 颈外动脉 被分割，其分支也被烧灼和切割。颈外动脉的残端回缩。Coddly 在颈总动脉分叉处上方的近端颈内动脉周围准备了两条松散的领缝线。

颈总动脉用血管夹暂时闭合。这导致分叉处远端的灌注值下降约 50%。颈内动脉同样用血管夹夹住，并使用微型剪刀在颈外动脉回缩残端附近进行动脉耳切术。

热钝缝线通过动脉和颈外动脉引入并推进，直到到达颈内动脉上的血管夹。轻轻收紧颈内近端周围的两条松散的项圈缝合线以避免反流血流，但不足以伤害动脉壁。然后从颈内动脉中取出血管夹，腭三动脉与颈内动脉分叉。

由于缝合线很轻柔，因此必须提前小心以避免重新定向。观察到多普勒读数的第二个下降。当钝缝线到达大脑中动脉时，必须再次收紧衣领缝合线以避免逆行出血。

现在可以让鼠标处于缺血状态一段适当的时间。缩回钝缝线可恢复血流，如多普勒监测仪上的升高所示。缝合线完全移除后，对颈外动脉的残端进行烧灼。

为防止术后出血，必须注意保持颈总动脉的通畅。然后松开并切掉颈内动脉近端的领缝合线，并取下颈总动脉上的夹子以恢复血流。这通过多普勒读数的第二次跳跃来表示。

一旦小鼠恢复意识，就可以根据 5 分制在不同时间点评估神经功能缺损。零分表示没有可观察到的神经功能缺损评分为 1 对应于轻度中风，表现为未能在中风半球的另一侧扩展 4 个 PA。对应于中度中风的 2 分通过沿与中风半球相反的方向盘旋来证明。

对应于严重中风的 3 分通过跌落在与中风半球相反的方向来证明。A 分为 4 的小鼠将表现出没有自发运动活动 以获得每搏输出量的测量值。在适当的时间点将大脑从颅骨中取出。

再灌注后，将大脑置于矩阵切片机中，并将整个大脑冠状切片。每隔两毫米，小脑和嗅球被丢弃。将每两毫米的切片在 2% TTC 溶液中于 37 度黑暗中浸泡 20 分钟。

脑切片的数字图像显示，TTC 将活组织染成红色，并留下梗塞组织，每个切片都是淡白色。此处标记为 1 的梗死区域。此处标记为 2 的整个同侧半球的面积和此处标记为 3 的对侧半球的面积都是用 Image J 程序测量的，该程序测量了所有切片的面积，无论体积如何，都可以通过对值的面积求和并乘以切片厚度来计算。

为了找到校正水肿的梗死体积，使用以下公式。该体积表示为同侧半球体积的百分比。MCO 模型提供可重现的结果。

但是，一些程序因素可能会干扰该技术的执行。缝合线末端的硅胶涂层很重要，因为它可以平滑缝合表面并降低内皮磨损或血管穿孔的风险。此外，缝合涂层可以修改以反映不同的实验目标。

距尖端超过 3 至 4 毫米的涂层将阻塞大脑中动脉近端的动脉，从而增加总每搏输出量。应小心使用彩色缝合线，以免限制迷走神经并轻轻系带，以免损伤 AAL 壁。小鼠体温会影响梗死的程度，因此应在整个手术过程中保持稳定。

我们希望观看此视频能帮助您了解手术过程，并为您自己的实验提供一个坚实的起点。感谢您的观看，祝您的实验好运。