大鼠肾脏脱细胞制备:一种由收获的大鼠肾脏生成无细胞血管化全器官支架的方案 关键词:脱细胞,器官支架,大鼠肾脏,血管化,组织工程,再生医学

0 次观看3:30 分钟 • February 22nd, 2023

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脱细胞全器官支架由具有完整血管网络的三维细胞外基质构成。这些支架可保留特定的组织成分和功能完整性,在器官生物工程中发挥着关键作用。

为了制备去细胞化大鼠肾脏,首先获取新鲜摘取的大鼠肾脏及其主要动静脉血管——腹主动脉和下腔静脉。结扎输尿管、细小动脉及静脉分支,以防止后续灌注过程中液体泄漏。

将肾脏置于适当的缓冲液中以确保器官的水合作用。将合适尺寸的导管插入主要血管并固定。将导管连接至蠕动泵。以适当的流速和压力,用含有抗凝剂的缓冲液灌注肾脏,持续所需的时间。

此步骤通过静脉流出道高效清除器官中的血液。将灌注液更换为非离子型表面活性剂,以通透细胞膜。随后,使用阴离子型表面活性剂灌注器官,有效溶解细胞膜和核膜,导致细胞裂解并释放细胞内含物。

释放的细胞成分和碎片从肾脏中流出,使其逐渐变得半透明。使用含有抗生素和抗凝剂的适当缓冲液灌注脱细胞肾脏,以清除器官中残留的表面活性剂和任何残留碎片。抗生素可防止脱细胞器官内细菌生长的可能性。

取左侧肾脏,保留腹主动脉和下腔静脉。结扎输尿管、胸主动脉、上腔静脉以及腹主动脉的分支。将器官置于含DPBS的10厘米培养皿中,保持湿润。使用23号导管插管腹主动脉和下腔静脉。

为去除残留血液,将套管连接至蠕动泵,用500毫升含16单位/毫升肝素的DPBS在5 rpm转速和37°C条件下灌注器官90分钟。为对肾脏进行脱细胞处理,先以1% Triton X-100灌注3小时,随后在40毫米汞柱的恒定压力下用0.75% SDS溶液灌注6小时。

为去除残留的SDS,先用含1%青霉素的蒸馏水灌注样本18小时,随后用无菌DPBS和每毫升16单位肝素灌注90分钟。

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最后更新:22 八月 2026