小鼠永久性大脑中动脉结扎的应用

本实验的总体目标是研究动物模型中的局灶性脑缺血。首先在左眼与耳根部之间的皮肤上做一个小切口，随后在颧弓与鳞状骨交界处进行颅骨开窗，暴露大脑中动脉，然后使用小型血管电凝器对大脑中动脉进行结扎。

最后，缝合皮肤以闭合伤口。最终可获得结果显示小鼠脑部左侧半球存在梗死灶。可通过TTC染色或磁共振成像（MRI）扫描小鼠脑组织，以实现对脑卒中的可视化观察。

卒中后的大脑也可用于测定蛋白质或 mRNA 的表达水平。大家好，我是 Garza Chola，罗切斯特大学 Gale Johnson 实验室的一名研究生。

该方法有助于回答脑卒中领域的一些关键问题，例如阐明导致缺血性脑组织细胞死亡的机制。手术前，需通过高压灭菌器对所有手术器械、纱布块和棉签进行灭菌。术中将手术工具保存在70%乙醇中，并在使用前于无菌纱布上晾干。

手术前两小时，用70%乙醇喷洒工作区域。向小鼠注射0.05毫克/千克的丁丙诺啡。该药物将在手术后立即再次给予，之后在术后最初的24小时内每三至五小时给药一次。

使用麻醉蒸发器，以3%异氟烷（ISO）、20%氧气的混合气体麻醉小鼠。通过流量计调节氧气流量。通过脚趾或尾部夹捏测试麻醉深度。

使用 2% 异氟烷维持麻醉水平。向小鼠眼睛涂抹人工泪液，并注意避免损伤眼睛。在手术过程中。

使用动物用毛发修剪器将小鼠置于其右侧卧位。剃除左侧从左眼至左耳根部之间的毛发区域。使用棉签交替蘸取聚维酮碘溶液和70%乙醇，轻轻擦拭该区域，以清洁皮肤。

需要重复操作。将小鼠置于连接直肠探针的加热垫上，使用矿物油插入直肠探针，以维持体温在37摄氏度。将小鼠置于显微镜下右侧卧位，并用胶带固定。

用直头精细剪刀在纱布海绵上剪出一个窗口，并覆盖手术区域。在左眼与左耳根部之间做一垂直切口。若手术过程中组织过度干燥，可使用弯头止血钳保持手术区域开放。

使用棉签涂抹无菌 PBS。用弹簧剪在颞肌上做一横向切口，并用镊子缓慢牵拉，使颞肌与颅骨轻微分离。用弯头镊子夹住下颌骨，用18号针头在颧弓与鳞状骨交界处进行小范围颞下颅骨开窗。

通过骨窗开颅，移除颅骨的小片骨质以暴露大脑中动脉（MCA）。在此过程中应避免损伤颧弓和眶内结构。使用小型血管电凝器结扎大脑中动脉的远端部分，将颞肌复位至其原始位置，并用5-0尼龙缝线缝合。

关闭切口部位后，停止麻醉并取出直肠探针。皮下注射第二次剂量的丁丙诺啡。将小鼠放回保持在37摄氏度的笼子中。

使用加热板。术后24小时内密切观察小鼠是否有任何不适表现，包括食欲或饮水量下降、蜷缩姿势、呼吸加快或毛发竖立。手术后立即为小鼠提供恢复凝胶。

手术后等待两到三小时。然后每三到五小时对小鼠皮下注射一次布托啡诺，持续至术后24小时。术后24小时，将小鼠深度麻醉，并用4%TTC灌注小鼠。

取出脑组织并置于4%多聚甲醛溶液中固定过夜。次日，将脑组织放入切片模具中，使用剃刀刀片将脑组织切成厚度为1毫米的切片。

将切片置于毫米刻度尺旁，使用与解剖显微镜相连的数码相机，在图像 J 软件中拍摄切片。

单击文件菜单并打开所需的照片。在程序中单击直线选项卡。在标尺的两个边缘之间画一条直线。

单击分析菜单并选择设置比例尺。将已知距离设为1，长度单位设为毫米。单击自由手绘圆选项卡。

绘制圆形以勾勒对侧半球的轮廓。点击分析菜单并选择测量。计算窗口将弹出，显示所绘制圆形的面积。

在同侧半球周围再画一个圆，排除白色描边区域。按之前所示方法测量该区域面积。新数值将被添加到计算窗口中。

第一个值与第二个值之间的差值代表梗死面积。对每1毫米厚度的切片重复上述步骤，计算每个切片中的卒中面积。通过将各切片中计算得到的卒中面积相加，计算卒中体积。

该图显示了野生型 C57BL/6 小鼠在永久性大脑中动脉结扎术后 24 小时的 TTC 染色脑组织。梗死部位呈白色，可在不同放大倍数和角度下观察到。图中所示为从梗死前部到后部的 TTC 染色脑组织切片，厚度为 1 毫米。

术后24小时计算体积。梗死体积约为23立方毫米。若操作得当，该技术可在30分钟内完成。

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