基于β-内酰胺酶的电导率生物传感器检测蛋白质-蛋白质相互作用

开始进行基于β-内酰胺酶的电导测定生物传感器实验时，取一个包含工作电极、对电极和参比电极的换能芯片。工作电极具有导电聚合物涂层，有助于目标抗原的固定。参比电极和对电极则没有该聚合物涂层。

将含有目标抗原的溶液加入芯片中。孵育。抗原被固定在工作电极表面。 通过 非共价相互作用。洗涤以去除未结合的抗原。

加入封闭溶液。溶液中的蛋白质会结合到工作电极上未结合的位点并将其封闭。

加入一种双功能嵌合蛋白至芯片，以检测已固定的抗原。该嵌合蛋白包含一种β-内酰胺酶——一种介导细菌抗生素耐药性的细菌蛋白。该酶与一种纳米抗体融合，后者为单域抗体的N端可变区。

孵育后，蛋白的纳米抗体与固定的靶抗原结合。洗涤以去除未结合的嵌合蛋白。

将芯片插入由计算机控制的数字万用表中。加入含有抗生素苄青霉素的检测溶液——该物质是β-内酰胺酶的底物。

苄青霉素与抗原结合的嵌合蛋白中的β-内酰胺酶结合并被水解，从而释放质子。质子引起聚合物电导率的变化。

绘制参比电极与固定化靶抗原的工作电极之间实时电导率差异，以确认靶抗原与嵌合蛋白的相互作用。

开始基于β-内酰胺酶的电导型生物传感器检测时，取一块包含工作电极、对电极和参比电极的换能芯片。工作电极具有导电聚合物涂层，有助于靶抗原的固定。参比电极和对电极则无此聚合物涂层。

将含有目标抗原的溶液加入芯片中。孵育。抗原将固定在工作电极表面。 通过 非共价相互作用。洗涤以去除未结合的抗原。

加入封闭溶液。溶液中的蛋白质会结合到工作电极上未结合的位点并将其封闭。

加入一种双功能嵌合蛋白至芯片，以检测固定的抗原。该嵌合蛋白包含一种β-内酰胺酶——一种介导细菌抗生素耐药性的细菌蛋白。该酶与一种纳米抗体融合，后者为单域抗体的N端可变区。

孵育后，蛋白的纳米抗体与固定的靶抗原结合。洗涤以去除未结合的嵌合蛋白。

将芯片插入由计算机控制的数字万用表中。加入含有抗生素苄青霉素的检测溶液——该物质是β-内酰胺酶的底物。

苄青霉素与抗原结合的嵌合蛋白中的β-内酰胺酶结合并被水解，从而释放出质子。质子诱导聚合物电导率发生变化。

绘制参比电极与固定化靶抗原的工作电极之间实时电导率差异，以确认靶抗原与嵌合蛋白的相互作用。