表面等离子体共振,使用传感器芯片研究生物分子相互作用

0 views • 5:21 min • July 8th, 2025

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要执行表面等离子体共振或 SPR 以研究生物分子相互作用,首先将传感器芯片放置在流通池中的 SPR 检测器上。这种金属涂层传感器芯片在芯片表面沉积了一层水凝胶材料,使其更适合蛋白质固定化。

芯片上覆盖病毒肽,病毒肽与水凝胶相互作用并固定在表面上。用碱性淬火溶液洗涤,以防止非特异性蛋白质相互作用。

偏振光直接照射到芯片上。在共振角处,金属电子吸收该光并共振,从而降低相应反射角处的反射光强度。

光电探测器收集这些反射光,处理器将该信号转换为基线,生成传感器图——表示传感器随时间响应的图表。

抗病毒剂溶液流入流通池。在流动过程中,抗病毒剂与芯片上固定的病毒肽相互作用。这种关联会改变折射率,从而改变反射光的角度和强度,最终导致传感器响应。

添加高离子强度的洗涤缓冲液,破坏两个分子之间的相互作用,导致它们解离并降低传感器响应。

分析传感图的形状,并评估生物分子相互作用中至关重要的两个分子的结合和解离。

对于双通道SPR系统,使用HBS-EP+作为电泳缓冲液,使用pH 1.5至1.6的10毫摩尔盐酸甘氨酸作为再生缓冲液,并打开仪器脱气器、自动进样器和泵。然后,用双蒸水清洗整个系统 1 小时。

接下来,将浸油滴到检测器上,并将涂有金薄膜的玻璃传感器芯片安装,并在上侧用羧甲基葡聚糖水凝胶功能化,直接安装到三端口流通池下方的检测器上。然后,通过拉下手柄来修复设置。

要将蛋白质配体固定到传感器芯片上,请单击菜单栏中的"表单"打开运行表,然后单击集成的 SPRAutoLink 软件中的"运行编辑器"。然后,从可用运行表列表中选择并单击BASIC_Immobilization,然后按照计算机屏幕上的实验过程步骤进行作。

接下来,单击"表格"部分中的"样品编辑器",填写放置在自动进样器中的两个样品架的试剂列表,以便进一步分析。单击菜单栏中的自动进样器进样器直接控制作为工具,将机架向前或返回原位,并选择 4 摄氏度作为工作温度。

通过单击"工具""泵直接控制"启动泵以注入双蒸馏水,并通过单击"SPR 仪器直接控制"记录数据,每次在新出现的窗口中开始。将偶联试剂添加到 300 微升小瓶中后,将它们放入自动进样器架中,然后单击运行启动运行表。

对于以每分钟 25,000 微升重新填充泵后的简单蛋白质-蛋白质相互作用,执行基线调整 30 秒。允许随后用双蒸水进行基线调整 1.5 分钟,然后用 1 摩尔盐酸乙醇胺 (pH 8.5) 淬灭活化的芯片表面。然后,将试管从液体采样器切换到脱气器,从双蒸馏水进入装有HBS-EP+的瓶子中。

单击表单,向下滚动,然后单击此作模式更改为"后处理"。然后,单击"添加"以选择每个流通池的数据图形式中随时间生成的结合曲线,并将叠加导出为滑动器文件。接下来,单击"文件"以打开文件保存选项,并通过对齐左右曲线并从配体通道的信号中减去第二个参考通道的信号来获得响应曲线。

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Last updated: 18 July 2026