0 次观看 • 6:05 分钟 • July 8th, 2025
核磁共振（NMR）波谱法能够实现原子水平的蛋白质-蛋白质相互作用检测。
为了研究球状蛋白与螺旋蛋白之间的相互作用，使用15N（氮同位素）标记纯化的野生型或突变型球状蛋白。在核磁共振（NMR）样品管中，将标记的球状蛋白与未标记的螺旋蛋白混合于含有NMR标准物质的溶剂中。将样品管插入核磁共振波谱仪中。
光谱仪的磁体产生强磁场，使15N标记的球状蛋白质核与磁场方向平行排列。射频（RF）脉冲激发15N核，使其与磁场方向反平行排列。
15N原子核在两个能态之间跃迁所需的脉冲频率定义了共振频率。将15N共振频率相对于核磁共振标准进行归一化，可得到15N化学位移。
调节磁场以使与15N键合的1H原子核与磁场方向平行排列。调整射频脉冲，并记录1H的化学位移。
在蛋白质相互作用过程中，相互作用的氨基酸残基周围的化学环境发生变化，从而改变15N-1H化学键及其相应的化学位移。绘制15N-1H核磁共振（NMR）谱图。
在没有螺旋蛋白的情况下，野生型球状蛋白表现出分辨良好的光谱峰。当螺旋蛋白与野生型球状蛋白相互作用时，光谱峰减弱。相反，将螺旋蛋白与突变型球状蛋白共同孵育时，光谱峰重新出现，表明二者之间无相互作用。
使用弹出命令"ej"开启气流，这将使样品从磁体中升起。现在，将样品放置在磁体上方开口处的转子中。使用命令"ij"插入样品。在继续操作前，请等待样品在磁体内完全稳定。
使用 "edc" 命令创建一个新的数据集，并通过选择实验 "ZGPR" 来加载标准质子核磁共振参数。填写名称、实验编号以及处理后数据文件夹编号字段。
在“设置溶剂”字段中选择溶剂，然后点击“执行'getprosol'”，以读取标准探头及溶剂依赖性参数。使用“锁场”命令将样品锁定至氘代溶剂，并等待其完成扫描并实现锁场。
通过使用自动调谐命令"atma"调节样品，校正磁体的共振频率。持续监测摆动曲线，直至自动调谐完成。
使用 "TOPSHIM" 对磁场进行匀场。匀场可调节磁场，以实现样品周围磁场的均匀性。若使用相同或相似的样品，建议在执行 topshim 前，使用命令 "wsh" 保存相同的匀场值，并用 "rsh" 读取这些值。
现在，使用 "rga" 命令调节接收增益，以获得最高的信噪比。将谱图中心置于水共振偏移位置，并使用 "calibo1p1" 设置高功率的 90 度质子脉冲。
使用 Zero Go 采集质子谱 zg 命令与处理 efp 这包括指数乘法、包含线宽展宽的自由感应衰减、自由感应衰减的傅里叶变换，以及 pk 进行相位校正。
使用不带积分选项的多项式，应用自动相位校正 "apk" 和自动基线校正 "absn"。在实验中选择 "SFHMQC3GPPH"，为 SOFAST HMBC 实验创建一个新的数据集。
复制质子谱中优化后的 P1 和 O1，并使用命令 "getprosol 1H p1 plw1" 填充依赖 P1 的脉冲，其中 P1 为优化后的 P1 值，plw1 为 P1 的功率水平。接下来，优化 CNST54 参数以设置酰胺化学位移的偏置。同时优化 CNST55 以定义带宽，从而覆盖感兴趣的谱图区域，并实现接收增益的优化。
选择这些参数时，需从二维谱中提取第一个自由感应衰减信号（FID），并根据观测到的信号来确定参数值。此外，通过调整弛豫延迟、扫描次数和虚扫描次数，并使用命令"gs"（即“开始扫描”）实时监测数据质量，以获得可接受的信号灵敏度。最后，使用零点开始命令"zg"记录谱图。