定量流式细胞术研究标记的蛋白质-磷脂囊泡相互作用

0 次观看2:43 分钟 • July 8th, 2025

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细胞膜上的蛋白质-磷脂相互作用对于多种细胞过程的调节至关重要。

要使用定量流式细胞术在体外检测靶蛋白-磷脂相互作用,请在缓冲液中取出一根装有所需浓度的细胞膜模拟物(微米级、亲脂性染料标记的磷脂囊泡)的试管。

溶液中加入适当浓度的不同荧光标记的靶蛋白。

悬浮液注入流式细胞仪。将流体系统参数设置为低流速,以便为蛋白质-磷脂相互作用留出足够的时间。

当荧光标记的蛋白质和磷脂囊泡在流道中相互作用时,与囊泡结合的蛋白质浓度增加。

当这些复合物穿过来自特定荧光通道的激光束以提供适当的波长时,它们会被激发。复合物中的这些激发蛋白和磷脂囊泡在弛豫到基态时发出各自的荧光信号,这些信号被适当的检测器捕获。

检测到蛋白质的高平均荧光强度表明蛋白质与磷脂囊泡结合。

通过在 Tyrode 缓冲液中稀释磷脂囊泡至 1 微摩尔浓度和总体积 250 微升来开始动力学结合实验。然后,将浓度为500纳摩尔的荧光标记凝血因子X或fX-fd与磷脂囊泡以1:1的比例混合,得到500微升的总体积。

立即将500微升混合悬浮液以激发波长为488纳米的流速和585纳米的发射滤光片注入流式细胞仪中,通道FL2宽度为42

接下来,测量通道FL4中的平均荧光,激发波为633纳米,发射滤光片为660纳米,宽度为20。当达到结合饱和时,用 Tyrode 缓冲液快速稀释样品 20 倍,并监测解离情况,直到达到基线荧光或平台期。

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最后更新:1 八月 2026