定量流式细胞术研究标记蛋白与磷脂囊泡相互作用

细胞膜上的蛋白质-磷脂相互作用对多种细胞过程的调控至关重要。

检测目标蛋白与磷脂的相互作用 体外 使用定量流式细胞术，取一支含有所需浓度细胞膜模拟物（微米级、脂溶性染料标记的磷脂囊泡）的缓冲液管。

在溶液中加入适当浓度的不同荧光标记靶蛋白。

将悬液注入流式细胞仪。将流体系统参数设置为低流速，以提供足够的时间使蛋白质-磷脂相互作用充分进行。

当荧光标记的蛋白质与磷脂囊泡在流动通道中相互作用时，结合到囊泡上的蛋白质浓度增加。

当这些复合物通过特定荧光通道的激光束（提供适当波长）时，会被激发。复合物中的激发态蛋白质和磷脂囊泡在弛豫至基态时会发射相应的荧光信号，这些信号由相应的检测器捕获。

蛋白质的平均荧光强度较高，表明蛋白质与磷脂囊泡发生了结合。

通过将磷脂囊泡用Tyrode缓冲液稀释至1 µM的浓度和250 µL的总体积，开始动力学结合实验。然后，将浓度为500 nM的荧光标记凝血因子X或fX-fd与磷脂囊泡按1:1比例混合，得到500 µL的总体积。

立即将500微升混合悬液以488纳米激发波长和585纳米发射滤光片（宽度为42）的流式细胞仪通道FL2，按设定流速注入仪器中。

接下来，使用激发波长为633纳米、发射滤光片波长为660纳米（带宽20纳米）的FL4通道，测定平均荧光强度。当结合达到饱和后，立即将样品用Tyrode缓冲液稀释20倍，并监测解离过程，直至荧光信号达到基线或平台期。