耗散型微重力测量技术研究蛋白质-脂质双层相互作用

为了通过耗散型微重力测定法研究磷脂结合蛋白与脂双层之间的相互作用，需使用带有石英传感器的微天平。施加适当的电压后，夹在两个金属电极之间的石英层会以特定频率振荡。

将由单层脂质双分子层组成的小型单层囊泡悬浮液加入传感器表面。这些囊泡会吸附在涂有二氧化硅的亲水性表面上，从而增加传感器的质量，并使其振荡频率相应降低。

充满缓冲液的囊泡形成一层黏弹性层，导致能量耗散——即振荡的衰减。吸附的囊泡破裂，释放出内部的缓冲液。由此引起的质量减少使振荡频率升高。

破裂的小泡形成连续的双层结构，模拟了生物膜。双层结构的刚性降低了耗散。

加入含有钙离子的缓冲液以及目标蛋白。钙离子会与蛋白结合并改变其构象，从而使其能够与双分子层中的脂质分子结合。

蛋白质结合会增加传感器的质量，从而导致频率降低。双分子层的结构完整性不受影响，仅引起耗散的轻微增加。

加入螯合剂以螯合钙离子——使蛋白质从双分子层上解离。

当无结合蛋白时，振荡的频率和耗散恢复至无蛋白结合时的水平——证实了该结合完全依赖于钙离子，且脂双层保持完整。

使用镊子将经过等离子清洗的传感器小心地插入四个流动室中。避免对流动室和管路施加任何压力或扭转，以免造成泄漏。在开放流动模式下用柠檬酸盐缓冲液冲洗系统10分钟。

启动程序。使用软件开始记录基频第一谐波及其高次谐波的频率和耗散变化，直至频率和耗散基线稳定。

当基线稳定后，在柠檬酸盐缓冲液中加入SUV悬浮液。使用反应容器，移除1.5毫升的死体积。然后，将系统置于循环流动模式下关闭。再记录10分钟的频率耗散变化。

当SLB稳定后，在开放流动模式下，用含有所需钙离子浓度的运行缓冲液平衡系统40分钟。将含有钙离子的蛋白质加入运行缓冲液中。在循环流动模式下加入蛋白质，直至达到平衡稳态。