生成流感病毒对中和抗体的逃逸变体

取含有野生型和突变型毒株的流感病毒悬液。

一种称为血凝素（hemagglutinin，或 HA）的病毒包膜糖蛋白可结合宿主细胞表面的唾液酸，介导病毒进入细胞。

加入结合 HA 并阻断唾液酸结合位点的中和抗体，且抗体浓度逐级降低。

携带 HA 突变的突变株，其突变有助于逃避抗体中和，被称为逃逸变异株。

将混合物注射到无病原体的鸡胚中，使病毒进入尿囊液，并进行孵育。

抗体中和的病毒无法进入绒毛尿囊膜细胞。未被中和的突变病毒可进入细胞，复制并释放至尿囊液中。

收集含有病毒群体的羊水液。

加入针对HA的特异性抗体，并以递减的浓度进行，该抗体会中和除逃逸变异株以外的其他毒株。

加入鸡红细胞或红细胞。未被中和的逃逸变异体将与细胞结合，导致红细胞聚集，即称为血凝现象，从而证实逃逸变异体的产生。

首先将具有HI活性的中和抗体在1倍PBS中以100微升每份的体积制备4个浓度递增的稀释度，用于进一步分析。接着，在400微升体积中，用1倍PBS制备每毫升含100万个噬斑形成单位的病毒储备液。

然后，将100微升浓度为每毫升100万个噬斑形成单位的病毒与100微升各抗体稀释液或100微升1倍磷酸盐缓冲液混合。将样品置于37°C、含5%二氧化碳的培养箱中孵育1小时。

短暂涡旋振荡后，将每种混合物各200微升接种于无特定病原体的鸡胚中。随后，将鸡胚在37摄氏度、无二氧化碳条件下孵育40至44小时。孵育结束后，通过将感染病毒的鸡胚置于4摄氏度环境中至少6小时，使其安乐死。接着，按照前述方法收集鸡胚的尿囊液。

最后，按照文本方案中所述进行 HI 试验，以确认逃逸突变株。