针对中和抗体的流感病毒逃逸变异的产生

服用含有野生型和突变毒株的流感病毒混悬液。

一种称为血凝素或 HA 的病毒包膜糖蛋白与宿主细胞表面的唾液酸结合，介导病毒进入。

添加与 HA 结合的浓度递减的中和抗体，阻断唾液酸结合位点。

HA中携带有助于避免抗体中和的突变的突变株被称为逃逸变异。

混合物注射到无病原体的胚胎鸡蛋中，将病毒输送到尿囊液中，然后孵育。

抗体中和的病毒不能进入绒毛膜尿囊膜的细胞。未中和的突变病毒进入细胞、复制并释放到尿囊液中。

收获含有病毒种群的尿囊液。

引入浓度递减的 HA 特异性抗体，中和除逃逸变体之外的其他菌株。

引入鸡红细胞或红细胞。未中和的逃逸变异与细胞结合，导致红细胞聚集——称为血凝，确认逃逸变异的产生。

首先制备4种稀释液的目标抗体，以增加浓度的目标抗体，以每次稀释液100微升的体积进一步分析具有HI活性的中和抗体。接下来，在400微升体积的1倍PBS中制备每毫升100万个斑块形成单位的病毒储备液。

然后，将每毫升病毒 100 微升 100 万个斑块形成单位与 100 微升每种抗体稀释液或 100 微升 1 倍 PBS 混合。将样品在37摄氏度的培养箱中与5%二氧化碳孵育一小时。

短暂涡旋后，将每种混合物200微升注射到特定的无病原体胚胎鸡蛋中。然后，将鸡蛋在37摄氏度下孵化，不含二氧化碳40至44小时。孵化后，将病毒感染的受感染胚胎卵置于 4 摄氏度下至少 6 小时，将其处死。接下来，如前所述从鸡蛋中收获尿囊液。

最后，通过执行文本协议中所述的HI测定来确认逃逸变体。