0 次观看 • 2:10 分钟 • July 8th, 2025
通过加入适量的阳离子聚合物以及分别用于抗体重链和轻链基因的质粒载体，制备转染混合物。
带正电荷的聚合物与带负电荷的质粒结合，形成复合物。
将该转染混合物加入含有在无血清培养基中培养的人胚胎肾细胞的多孔板中，并进行孵育。
复合物通过内吞作用进入细胞，导致内体肿胀并破裂，从而将其释放到细胞质中。
阳离子聚合物在核膜上形成孔隙，促进载体进入，并使其得以转录，随后翻译成重链和轻链蛋白。
这些蛋白质会转移至内质网，在此处重链和轻链蛋白通过二硫键二聚化并共价连接，形成抗体。
抗体前往高尔基体进行进一步的翻译后修饰，并被包装到囊泡中以释放到细胞外。
收集含有已释放抗体的培养基。添加无血清培养基以持续产生抗体。
将HEK细胞置于添加了补剂的DMEM培养基中，在75平方厘米的培养瓶中培养至75%融合度。每进行一次重链/轻链转染，需配制1.75毫升无血清DMEM混合液，其中包含4.5微克重链载体、3微克轻链载体以及50微升聚乙烯亚胺溶液。将此混合液轻轻加入HEK细胞培养板中，并轻柔旋转培养板使溶液均匀覆盖细胞表面。
将培养板孵育过夜，随后开始每天收集培养基，并更换为无血清培养基。培养基中含有抗体，可连续收集四天。