一种用于研究抗体激活Fc受体的体外人工激活检测方法

取自然杀伤（NK）细胞的悬液。

加入抗CD20单克隆抗体并孵育。

在缺乏表达 CD20 抗原的靶向癌细胞时，抗体的 Fc 区域会与自然杀伤细胞表面的 FcγRIIIa 受体结合。

孵育后，加入预冷的培养基。离心并去除未结合的抗体。

接着加入抗人κ轻链抗体。孵育。

这些二抗与单克隆抗体的κ轻链结合。

抗体交联模拟靶抗原结合，从而触发细胞内信号级联反应。

这会导致在没有癌细胞的情况下对自然杀伤细胞（NK细胞）产生人工刺激。

活化的NK细胞会发生细胞骨架重排并释放细胞毒性颗粒。

此外，这些细胞还会产生趋化因子和细胞因子。

在所需孵育时间结束后，加入预冷的培养基以终止细胞刺激。

离心试管。收集上清液和细胞沉淀，用于后续分析抗体介导的自然杀伤细胞效应功能。

将100微升重悬的自然杀伤细胞分装至1.5毫升离心管或96孔U型底板中，并将细胞置于冰上。将利妥昔单抗或其他目标抗体配制为浓度100微克/毫升。

每管细胞中加入1 µL，使终浓度为1 µg/mL，并将细胞在冰上孵育30分钟。孵育期间，用培养基配制浓度为50 µg/mL的抗人κ轻链抗体溶液。每份细胞样品需要50 µL抗体溶液。

将抗体溶液在加热块或水浴中升温至 37 摄氏度。细胞孵育完成后，向每根试管中加入 1 毫升冰浴培养基，并在 4 摄氏度下以 135 × g 离心 5 分钟。再用 1 毫升冰浴培养基洗涤细胞一次。最后一次洗涤后吸除上清液，并加入 50 微升抗人 kappa 轻链抗体溶液以活化细胞。立即将细胞样品置于 37 摄氏度的加热块或水浴中，并孵育至预定的分析或其他操作时间点。

处理多个样本的最佳方法是使用置于37度水浴中的浮动架，当需要立即终止所有反应时，可将浮动架取出并置于冰上。