一种纯化中国仓鼠卵巢细胞产生的单克隆抗体的技术

取一个FPLC层析柱，该柱中装有固定化蛋白A的多孔玻璃树脂——一种可结合抗体的细菌蛋白。用中性pH缓冲液平衡该层析柱。

加入从中国仓鼠卵巢细胞收获的细胞培养液，其中含有单克隆抗体以及污染性蛋白质和DNA。

蛋白A结合抗体的Fc区，使其固定。

一些污染物非特异性地结合到树脂上，其余部分则流过。

在色谱图中，上样过程中紫外吸光度升高表明穿流液中的蛋白质浓度较高。

用平衡缓冲液洗涤，以去除未结合的污染物，可通过吸光度降低来判断。

用高盐缓冲液冲洗，破坏非特异性相互作用并去除污染物，这可通过一个较小的杂质峰来指示。

加入低pH洗脱缓冲液以破坏Protein A与抗体之间的相互作用，从而洗脱抗体，并通过追踪相应峰收集抗体。

中和收集的抗体的pH值，以防止其降解。

首先打开与纯化系统连接的软件，并在组分收集器中放置 15 毫升的锥形管用于收集纯化的抗体洗脱液，以及 50 毫升的锥形管用于收集高盐洗涤过程中的流穿液。

接下来，将经过0.22微米孔径滤膜过滤的收获细胞培养液加入一个带有封帽喷嘴的空的12毫升注射器中。取下封帽后，将注射器喷嘴插入纯化系统的手动进样口。旋转注射器以固定到位，然后推动活塞，直至样品全部注入，并可在连接的10毫升大体积进样环中观察到。

选择已保存的方法，当仪器软件提示时，点击运行。当所有抗体均已被洗脱后，立即用1摩尔三羟甲基氨基甲烷（Tris）碱将纯化的蛋白质中和至pH约5.5。