一种用于检测免疫球蛋白 G 的纸质免疫分析法

从氨基功能化的滤纸片开始，将其浸入戊二醛（一种交联试剂）中。

戊二醛与氨基发生反应 通过 胺醛反应

将圆盘放入试管中，加入水，振荡并抽吸以去除残留的戊二醛。

干燥后，加入针对免疫球蛋白G-Fc片段的捕获抗体。这些抗体上的氨基与纸片上的醛基发生反应，从而实现其共价固定。

洗涤以去除未结合的抗体，并加入封闭缓冲液以防止非特异性结合。

接下来，将含有免疫球蛋白G分子的待测样本加到纸盘上。免疫球蛋白G分子与捕获抗体发生相互作用。

加入辣根过氧化物酶标记的IgG-Fc片段特异性检测抗体，与预先结合的免疫球蛋白G相互作用。

洗涤以去除未结合的抗体，然后加入显色底物和过氧化氢的混合液。

在过氧化氢存在下，辣根过氧化物酶催化显色底物的氧化反应，在圆盘上产生蓝色，表明免疫球蛋白 G 的存在。

向一个20毫升的玻璃瓶中加入5毫升0.05%的戊二醛溶液。将15个氨基功能化的中流速滤纸圆片浸入该溶液中，在室温下振荡孵育1小时。同时，重复此步骤以制备另外15个醛基功能化的快速流速滤纸圆片。

为了去除纸片上未反应的戊二醛，首先将中速滤纸片和快速滤纸片分别放入两个15毫升离心管中。然后向每个管中加入5毫升去离子水，振荡10秒。用移液器抽吸去除水分。重复此步骤两次，以彻底清除任何未反应的戊二醛。

然后，将纸片置于37摄氏度的烘箱中干燥。干燥后，向中速流动滤纸片加入5微升浓度为0.025毫克/毫升的小鼠IgG-Fc片段抗体，向快速流动滤纸片加入8微升。

孵育20分钟后，在未去除抗体的情况下，向每个纸片加入10微升50毫摩尔磷酸盐缓冲液（PBS），pH值为7.4。继续孵育40分钟，以完成胺-醛反应。将纸片置于纸巾上，用0.2毫升洗涤缓冲液洗涤。重复洗涤三次。

将纸片在37摄氏度的烘箱中干燥后，在室温下用15微升封闭缓冲液封闭纸片10分钟。然后，在纸巾上用0.2毫升洗涤缓冲液洗涤每张纸片。重复洗涤三次。

接下来，运行IgG标准品。将不同浓度的IgG各取10 µL，每种浓度设三个复孔，分别加样至各个圆盘上。室温孵育1小时。用0.2 mL洗涤缓冲液在纸巾上清洗纸盘，重复洗涤3次。

洗涤后，加入10 µL HRP标记的小鼠IgG-Fc片段抗体，室温孵育1小时。将纸片置于纸巾上，用0.2 mL洗涤缓冲液洗涤。重复洗涤三次。

最后，将10 µL的TMB和过氧化氢混合液加入每个纸片上。孵育5分钟后，使用数码相机或智能手机拍摄所有纸片的图像，并按照文中的实验方案进行分析。