一种体内追踪双特异性抗体诱导T细胞向肿瘤迁移的技术

取一只皮下移植有高表达肿瘤相关抗原（TAA）异种移植瘤的麻醉免疫缺陷小鼠。

通过眼后静脉注射表达荧光素酶的效应T细胞。

皮下注射白细胞介素2，一种支持效应T细胞存活的细胞因子。

通过眼后静脉注射经基因工程改造、含有T细胞和肿瘤细胞结合位点的双特异性抗体。让小鼠恢复。

抗体和T细胞到达肿瘤 通过 循环

抗体结合T细胞上的CD3和肿瘤细胞上的肿瘤相关抗原（TAA），诱导效应T细胞释放毒素，从而启动肿瘤细胞的凋亡，并释放趋化因子以募集更多T细胞至肿瘤部位。

麻醉小鼠，经眶后静脉注射荧光素酶底物，然后进行后续操作 体内 成像

T细胞内的荧光素酶氧化底物，发出生物发光。

随时间观察生物发光现象。信号强度与肿瘤内T细胞浸润程度呈正相关。

使用26号针头对小鼠麻醉后，通过眶后静脉注射2000万T细胞，溶于100微升培养基中。皮下注射1000单位重组IL-2以支持T细胞存活 在 体内 然后，通过眶后或腹腔注射给予双特异性抗体。

对于 在 体内 成像时，对麻醉小鼠经眶后静脉注射100微升含3毫克D-荧光素酶底物（D-luciferin）的溶液，使用26号针头。为获取图像，将小鼠置于成像仪的避光暗室中，使移植瘤侧的 flank 朝上对准相机。通过采集控制面板选择生物发光、拍摄及叠加模式，曝光时间设为自动，binning设为中等，F-stop设为1，然后采集图像。

在获取第一张图像后，将曝光时间设置为与第一张图像自动计算出的时间一致，以便能够直接比较后续图像。再获取一组小鼠仰卧位的图像，以评估肺部中 T 细胞的存在情况。