转染哺乳动物细胞的批量过量培养中抗体的生产

从一个含有稳定转染的哺乳动物细胞的培养瓶开始，细胞培养于添加了非离子型表面活性剂的无血清培养基中，以防止细胞聚集。

这些细胞携带经过修饰的基因组，其中整合了用于治疗性抗体生产的重链和轻链基因。

介绍胰蛋白胨，它是一种富含肽和氨基酸的营养物质，对细胞代谢至关重要。

细胞利用这些氨基酸和肽进行增殖，导致过度生长，从而支持更高的抗体产量。

细胞中基因的表达驱动了重链和轻链多肽的合成。

在内质网中，这些链折叠并形成二聚体 通过 链间二硫键，形成治疗性抗体。

在高尔基体中，抗体会经历翻译后修饰。随后它们被包装进囊泡，并释放到培养基中。

延长细胞孵育时间以增加抗体产量。

当细胞活力开始下降时，收集上清液。

过滤含有治疗性抗体的上清液，并将其在较低温度下保存以备后续使用。

在两个培养瓶中，分别将种子细胞以每毫升 2 × 10⁵ 个细胞的密度接种于 100 毫升无血清培养基中。于 37 °C、5% 二氧化碳、120 转/分钟条件下培养细胞 24 小时。向添加营养成分的培养体系中加入胰蛋白胨，使其终浓度为 0.5%。随后，使用无血清培养基将未添加营养成分的培养体系调整至相同体积。继续培养细胞额外七天。

从培养的第8天开始，每日使用血细胞计数板对细胞进行计数，以监测细胞活力。当细胞活力低于80%时，以3,000 × g 离心15分钟收集培养物。随后，通过0.22微米滤器对上清液进行过滤除菌。短期可将上清液保存在4摄氏度，长期则需在-80摄氏度冷冻保存。