一种可视化蛋白质亚细胞定位的免疫标记技术

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首先在稳定

组织结构的二甲胂酸钠缓冲液中洗涤固定的心脏切片。将切片浸入四氧化锇中以染色膜脂。

用醋酸钠处理以保持最佳染色 pH 值。

将醋酸铀酰添加到染色生物分子中,在显微镜检查过程中提供更好的对比度。

用增加浓度的乙醇和丙酮对组织进行脱水。

组织嵌入树脂中,获得超薄切片,并将它们转移到显微镜网格上。

引入间高碘酸钠以去除四氧化锇,揭开细胞蛋白的掩盖。

该化合物还会氧化糖蛋白,产生活性醛基团,通过甘氨酸处理中和这些醛基团。

引入封闭缓冲液,防止非特异性抗体结合。

添加靶蛋白特异性一抗,然后添加生物素化二抗。

添加与生物素结合的链霉亲和素偶联量子点。

电子显微镜下,量子点标记区域表现出更高的对比度,有助于目标蛋白质的精确亚细胞定位。

固定24小时后,在0.1摩尔二甲胂酸钠缓冲液中洗涤组织两次,持续20分钟。从二甲胂酸钠缓冲液中取出组织,并在室温下浸入 2% 四氧化二锇溶液中 4 小时。

渗透后,在室温下将组织浸入2%乙酸钠溶液中10分钟。接下来,将组织在室温下浸入 2% 醋酸铀酰溶液中 1 小时。醋酸铀酰染色后,通过分级醇和丙酮依次脱水组织。

手稿所述,将脱水组织包埋在低粘度环氧树脂中。将组织放入8毫米微模、模具中的新鲜树脂中,并在70摄氏度下固化包埋组织过夜。使用超 45 度刀找到感兴趣区域后,生产淡金色超薄切片。将这些超薄部分放在 200 目铜网格的钝面上。

通过

将 20 微升蚀刻溶液偏高碘酸钠放在干净的石蜡薄膜上,揭开抗原来开始染色。将带有组织切片的干燥网格放在蚀刻溶液的液滴上。在室温下将切片网格留在溶液上 30 分钟。将蚀刻的组织切片放在一滴蒸馏水上 60 秒,以清洗它们。

通过将切片网格放在室温下 0.05 摩尔甘氨酸溶液的液滴上 10 分钟来阻断残留的醛。在滤纸上吸干网格的边缘以去除残留的甘氨酸溶液。将切片网格放入 10 至 20 微升封闭溶液中,在室温下放置 25 分钟。

滤纸上吸干网格边缘,并将网格切片放在抗体稀释剂上,以便在室温下调节10分钟。将网格切片与一抗在加湿室中孵育 1 小时 30 分钟。吸干网格,并用抗体稀释剂洗涤网格切片两次,每次 5 分钟。

网格切片与生物素化二抗在加湿室中孵育 1 小时。网格吸干后,用抗体稀释剂洗涤网格切片两次,每次 5 分钟。在室温下,在市售的链霉亲和素偶联QD中孵育网格切片1小时。用铝箔覆盖腔室以防止暴露在光线下。用滤纸吸干网格边缘后,将网格部分放在水滴上清洗两分钟,然后吸干网格边缘。

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Last updated: 18 July 2026