基于肽阵列的器官移植受者抗供体HLA同种抗体检测

取自器官捐献者的白细胞抗原（HLA）序列制备的肽阵列，该阵列包含固定在纤维素膜上的不同肽段。

每种肽至少含有一个供体与受体HLA序列之间的氨基酸错配，代表了一种可能引发抗体介导器官排斥的表位。

使用封闭缓冲液处理，以防止非特异性抗体结合。

加入器官移植后采集的受者血清，其中含有同种异体抗体。

这些针对供体 HLA 产生的抗体，会结合到其靶向的表位上。

加入与同种抗体结合的辣根过氧化物酶标记的二抗。

加入化学发光底物和过氧化氢。过氧化物酶利用过氧化氢氧化底物，产生发光。

扫描膜以获得图像。

加入缓冲液以洗脱结合的抗体。用移植前受体血清重新孵育，并获取图像。

与移植前图像相比，移植后图像上的暗斑表示可引发异体抗体反应的供体特异性 HLA 表位。

当完成阵列合成后，使用20毫升含5%脱脂奶粉的TBST缓冲液（Tris缓冲盐水加0.1% Tween 20）在摇床上室温封闭膜，封闭时间应适当。随后，用20毫升新鲜TBST缓冲液洗涤膜三次，每次5分钟。接着，将膜与20微升受体粗血清溶于含2.5%脱脂奶粉的TBST缓冲液中，在室温下孵育2至3小时。

孵育结束后，用洗涤液洗膜3次，每次10分钟，然后将膜与辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG二抗在室温下孵育2小时。

用 TBST 进行三次 10 分钟洗涤，去除未结合的二抗，然后将膜置于 5 毫升新配制的鲁米诺溶液和 5 毫升过氧化物溶液中孵育显影。一分钟后，在合适的成像仪上观察增强化学发光信号。

保存显影后的图像后，将膜置于37摄氏度下，用20毫升商用洗脱缓冲液孵育20分钟，随后在TBST中清洗三次，每次10分钟。然后按照前述方法，用同一患者在不同时间点采集的血清样本对膜进行封闭、重新孵育和检测。