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0 次观看 • 4:57 分钟 • July 8th, 2025
从一个带有打印的聚糖子阵列的功能化糖芯片开始，这些子阵列按阵列区块排列。
亚阵列中的每个点代表一种不同的聚糖——一种基于碳水化合物的聚合物，其单糖组成、链长和分支模式各不相同。
使用封闭缓冲液处理糖芯片，以封闭非特异性相互作用位点。
转移糖芯片，并在含去污剂的缓冲液中加入稀释的小鼠血清，以最大限度减少抗体聚集。在振荡条件下孵育。
振荡可促进血清均匀分布，从而基于不同的分子特性实现抗糖抗体与特定聚糖的选择性结合。
用含有表面活性剂的缓冲液以逐渐降低的浓度洗涤，以破坏非特异性结合并冲洗。
将糖芯片与抗小鼠生物素标记的二抗孵育，使其与预先结合的抗糖抗体相互作用，随后进行洗涤。
加入荧光标记的链霉亲和素，与生物素化的二抗结合。洗涤并去除多余溶液。
扫描糖芯片，并观察不同位置是否存在明显的荧光信号点，以提示血清中存在针对特定聚糖的循环抗体。
按照文本方案中的说明配制缓冲液 #1 至缓冲液 #4。在准备糖芯片和样品时，将装有载片的储存盒置于实验台上，直至其达到室温。打开盒子，将糖芯片转移至孵育 chamber 中，该 chamber 应预先放置湿润的滤纸以维持内部湿度恒定。
同时，用缓冲液1在1.5毫升离心管中稀释小鼠血清。使用涡旋混合器将血清溶液混匀5秒。混匀后，将稀释后的血清置于37°C水浴中孵育10分钟，以避免免疫球蛋白聚集。然后在25°C条件下，以10,000 × g 离心3分钟。
收集上清液，并弃去任何沉淀物。将糖芯片小心放入孵育室中。加入1毫升缓冲液#3，孵育以去除糖芯片表面的任何残留物质。在25摄氏度下保持糖芯片垂直放置15分钟，并用塑料巴斯德吸管滴加数滴缓冲液#3重新洗涤。
然后，使用滤纸小心地从糖芯片表面移除缓冲液。将糖芯片重新放回孵育室中。使用微量移液器将稀释后的血清样品均匀覆盖在糖芯片表面。用移液器吸头确保糖芯片表面所有干燥区域均被稀释的血清样品覆盖。
在37摄氏度下以轨道振荡方式孵育1.5小时。孵育结束后，去除多余的样品，将糖芯片置于25摄氏度的缓冲液#3中浸泡5分钟。随后将糖芯片转移至含有缓冲液#4的容器中，最后用超纯水洗涤糖芯片。
将糖芯片在175 × g、25 °C条件下离心1分钟，以去除液体。将糖芯片重新放入孵育室后，将其表面覆盖山羊抗小鼠生物素偶联物溶液。在37 °C下以轨道振荡方式孵育1小时。去除未结合组分，并重复洗涤步骤。
离心后，将糖芯片置于避光条件下，用缓冲液#2配制的每毫升含2微克相应荧光染料标记的链霉亲和素溶液，在25摄氏度孵育45分钟。避光操作去除未结合组分，并重复洗涤步骤后，将糖芯片空气干燥。
扫描芯片时，将糖芯片置于暗处直至其升至室温。同时，打开载片扫描仪和激光器。手持微阵列，将糖芯片插入插槽，直至其接触后壁。运行Easy Scan程序对糖芯片进行扫描，并将扫描结果保存为.tiff文件。