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从一块经过钝化的检测板开始，该检测板包被有针对狂犬病免疫原性糖蛋白的特异性单克隆抗体，并含有阻断剂以防止非特异性相互作用。
依次引入糖蛋白含量递减的系列稀释参考疫苗和测试狂犬病疫苗。密封酶标板以防止污染。
孵育期间，免疫原性糖蛋白与包被的单克隆抗体发生相互作用 通过 一个特定的抗原位点。
孵育结束后，移除薄膜，吸除上清液，并洗涤平板。
加入酶偶联的糖蛋白特异性单克隆抗体，该抗体结合糖蛋白上不同的抗原位点，形成免疫复合物。
加入含有底物和显色剂的溶液。当底物与酶相互作用时，会引发显色剂的氧化反应，从而改变溶液的颜色。
加入终止溶液以灭活酶。
测定吸光度，并使用参考疫苗的数值绘制标准曲线。
确定参考疫苗稀释液的吸光度与糖蛋白含量之间呈线性关系的区域。然后，根据测试疫苗稀释液在此区域内的吸光度值，推算其糖蛋白含量。
清洗刀片时，向每个孔中加入 300 微升洗涤缓冲液。然后小心抽吸，并将孔内液体转移至含有 2.6% 次氯酸钠溶液的容器中。重复此洗涤步骤五次，以充分清洗致敏板。
此后，将微孔板倒置，室温下置于一张吸水纸上干燥一分钟。用一毫升蒸馏水重悬参考疫苗，使狂犬病病毒糖蛋白的终浓度为每毫升10微克。用稀释液将重悬后的参考疫苗进行10倍稀释，使狂犬病病毒糖蛋白浓度达到每毫升1微克。
接下来，按照文本方案中的表一说明，用稀释液对该参考疫苗进行六次连续的两倍稀释。每孔加入200 µL稀释液，设两个复孔作为空白对照；每个参考疫苗稀释度每孔加入200 µL，同样设两个复孔。
然后，用稀释液将待检疫苗配制成10倍稀释液，并按照文本方案中的表二所述，用稀释液配制七种两倍连续稀释的待检疫苗。将每种待检疫苗稀释液各200 µL重复加样至微孔板的每个孔中。用粘性封板膜覆盖微孔板，在37 °C孵育1小时。
此后，移除薄膜，小心抽吸，并将每孔中的内容物转移至含有2.7%次氯酸钠溶液的容器中。洗涤板时，向每孔加入300 µL洗涤缓冲液。小心抽吸，并将每孔中的内容物转移至含有2.6%次氯酸钠溶液的容器中。
重复洗涤过程五次，以去除未结合的抗原，并保留与包被抗体结合的G蛋白三聚体。将洗涤后的微孔板倒置，室温下在吸水纸上干燥一分钟。然后，向每孔中加入200 µL用稀释液配制的推荐稀释度的辣根过氧化物酶标记D1单克隆抗体。
用封口膜覆盖微孔板，在 37 摄氏度下孵育 1 小时。随后，移除封口膜，小心吸出孔内液体，并将每孔内容物转移至含有 2.6% 次氯酸钠溶液的接收容器中。洗涤微孔板时，向每孔加入 300 µL 洗涤缓冲液。
小心吸出液体，将每孔中的内容物转移至含有2.6%次氯酸钠溶液的接收容器中。重复此洗涤过程五次，以去除未结合的过氧化物酶标记抗体。将洗涤用微孔板倒置，室温下置于一张吸水纸上静置干燥一分钟。
接下来，向每个孔中加入 200 微升底物显色液。用封板膜密封微孔板，在室温下避光孵育 30 分钟。然后，向每个孔中加入 50 微升终止液以终止反应。
小心擦拭微刀片底部，并将其放入分光光度计中。测定所用各孔在492纳米处的光密度值。将这些数据收集到电子表格文件中以供分析。随后，根据文本方案中所述，绘制参考疫苗曲线和光密度值的图表。