一种利用抗体微阵列芯片检测蓝细菌菌株的技术

0 次观看3:31 分钟 • July 8th, 2025

从一块印有特异性抗体的抗体微阵列芯片开始。

每个位点都含有一种针对特定蓝藻菌株的特异性抗体。

用封闭缓冲液处理芯片,以尽量减少非特异性相互作用。

在具有多个孔的杂交盒中组装芯片。

将环境样品加入到孔板中,并在优化条件下进行孵育。

样品中含有多种细菌,包括不同的蓝细菌菌株,这些细菌会与打印芯片上的特异性抗体发生相互作用。洗涤芯片以去除未结合的细菌。

加入含有荧光团标记的抗蓝藻菌株抗体的抗体混合物,该抗体可与相应蓝藻细胞上的特异性抗原结合。去除未结合的抗体。

拆卸芯片盒,清洗并干燥芯片,然后进行扫描。

特定位置的荧光表明样品中存在特定的蓝藻菌株。

按照供应商的说明,将载玻片放入一个 3×8 孔的微阵列杂交盒中。或者,在修改抗体点样模式后,可使用定制的杂交盒(例如此处所示的杂交盒),或直接使用盖玻片进行装置设置。

在载玻片和样本盒组装完成后,用移液器将最多50微升的每种样品提取液或其在提取孵育缓冲液中的稀释液加入样本盒的每个孔中。或者,也可将样品加载到其他孵育装置中,或直接使用盖玻片。

作为阴性对照,将 50 微升 TBST-RR 缓冲液加入到卡盒的至少两个独立孔中。在室温下孵育 1 小时,每 15 分钟用移液器吹打混匀一次;或在 4 摄氏度孵育 12 小时。

清洗微阵列时,将卡盒放平,轻轻在干净的吸水纸上轻拍。然后向每个孔中加入 150 µL 提取孵育缓冲液进行清洗,并如前所述在吸水纸上轻拍以去除缓冲液。重复此清洗步骤三次。

向每个孔中加入 50 µL 含有 17 种抗蓝细菌菌株抗体的荧光抗体混合物。将样品在室温下孵育 1 小时,或在 4 °C 下孵育 12 小时。

洗涤微阵列时,小心将盒体放平,轻轻在干净的吸水纸上轻拍。然后加入150微升提取孵育缓冲液,再通过在纸巾上轻拍去除缓冲液。重复洗涤三次。接着,拆开盒体,将玻片浸入0.1x PBS溶液中快速漂洗。如前所述,快速离心以干燥玻片。

使用荧光扫描仪,在远红外荧光染料的最大发射峰处扫描载玻片的荧光信号。通过调整增益值,以不同的扫描参数对微阵列采集多张图像。

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最后更新:29 八月 2026