将 Aβ 肽特异性抗体和 Aβ 寡聚体可控灌注至大鼠海马区

0 次观看5:29 分钟 • July 8th, 2025

取一只清醒的大鼠,其双侧海马体内已植入导管套管。

导管分别连接至皮下植入的渗透压泵,泵内含有淀粉样蛋白β(amyloid-beta)或特异性抗Aβ抗体以及对照抗体。

泵内高浓度的抗体通过其外部半透膜诱导周围组织中的水分子扩散,从而扩大渗透层。

这种扩增会压缩抗体储存库,从而促进抗体的可控释放。

将两根内套管连接至装有无菌水的导管,再连接至输液泵。

用水填充套管。

接着,吸取少量空气,形成一个气泡。

现在,用神经毒性Aβ寡聚体(Aβ肽的可溶性聚集体)填充套管。

将内插管插入引导套管中。启动泵以控制寡聚体的输注,利用气泡防止反流并监测输注速率。

根据需要持续给予多次寡聚物注射。

该模型已可用于研究Aβ寡聚体与抗体的相互作用。

安装前一日,根据生产商说明书,用6E10抗体或对照IgG1抗体填充渗透泵。将泵置于无菌蒸馏水中,并在37摄氏度下过夜孵育以激活泵体。

用3%异氟烷麻醉大鼠,并在肩胛骨之间区域剃毛后,使用含2%葡萄糖酸氯己定和2%异丙醇的溶液对皮肤进行消毒。用手术刀在肩胛骨之间做一处2厘米长的切口,随后找到与导向套管相连的PE-50导管。

接下来,用手术刀剪去带有牙科水泥的PE-50导管末端。将渗透泵连接到PE-50导管上,并在泵与导管连接处添加一些牙科水泥以固定连接。最后,用4/0缝线紧密缝合皮肤。将动物放回笼中,置于温热垫上,并在其从异氟烷麻醉中苏醒时进行监测。

按照先前报道的方法制备淀粉样蛋白β寡聚体溶液后,将溶液在室温下静置孵育1小时,使其动态且自发地聚集。随后,用5微升无菌蒸馏水填充每支注射器。

接下来,使用手术刀将两根PE-50导管剪成约60厘米长。用两个装有21号针头的1毫升注射器,将无菌蒸馏水注入两根导管中。在保持1毫升注射器连接在导管一端的同时,将每根导管的另一端自由端连接至Hamilton注射器。随后取下1毫升注射器,并检查导管内是否存在气泡。

将内插管插入 PE-50 导管末端。使用 Hamilton 注射器将每根内插管填充至 1 微升,然后将活塞回抽至 2 微升刻度处,形成一个气泡。

现在使用低吸附枪头通过上下吹打混合淀粉样蛋白β寡聚体溶液。混合过程中避免产生气泡。然后,将活塞回拉至3.5微升,使两个内 cannula 均吸入1.5微升的淀粉样蛋白β寡聚体溶液。

接下来,在两根导管中气泡的前后位置标记线条,作为持续输注的检查点。将清醒的大鼠以拥抱式固定并 immobilize 其头部。从双导管引导套管中移除假内管,然后将预先准备好的内管插入引导套管中。确认内管已完全插入并牢固固定于引导套管基部。随后,松开大鼠的拥抱式固定,将其放回笼中,以减少操作带来的应激。

打开输液泵,以每分钟 0.1 微升的速度注入 1 微升的β-淀粉样蛋白寡聚体溶液。输注过程中,观察注射器活塞是否从 3.5 微升移动至 2.5 微升,并确认两根 PE-50 导管中的气泡持续移动。检查大鼠,确保导管未发生缠绕。

输注结束后,将内插管保留原位再持续5分钟,以确保淀粉样蛋白β寡聚体溶液充分扩散。输注完成后,将大鼠置于舒适固定姿势,取出内插管及带帽的引导插管,以防止注入的溶液反流。放置一根止于引导插管弯臂前段的假插管。最后,将动物放回其笼中。