Name: 改性技术在小鼠冠状动脉结扎 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-29T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: 学习小鼠冠状动脉结扎手术技术以建立心肌梗死模型。该方法通过左胸切开术暴露心脏并结扎左前降支动脉，为心血管疾病研究提供可靠的实验平台。

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5 minutes

1. 实验方案正文
<ol>
	<li>手术前，通过吸入2-5%异氟烷对一只6周龄或以上的雄性小鼠（C57BL/6）进行麻醉。通过夹捏脚趾确认动物已充分麻醉。</li>
	<li>将失去意识的小鼠仰卧于加热垫上，以维持37 °C的恒定体温。剃除左侧胸前区的毛发。</li>
	<li>将小鼠固定在带有异氟烷气体腔的插管装置上。通过口腔插入内径为0.2的导管至小鼠气管，然后将插管后的小鼠置于无菌手术区域（由温控器维持37 °C），并将气管导管连接至呼吸机（呼吸频率为每分钟120次，压力为4-6 mmH2O）；使用碘伏和75%乙醇对术区进行消毒。</li>
	<li>在小鼠眼睛上涂抹眼用软膏。将标准心电图电极贴附于四肢脚掌，并将小鼠连接至心电图记录仪。</li>
	<li>使用无菌剪刀沿腋中线做1.5 cm切口。使用剪刀而非手术刀，以避免损伤小鼠皮下组织。随后使用钝头血管剪分离并牵开胸壁上的胸前肌。</li>
	<li>在第三与第四肋间行左侧开胸术，以暴露心脏前表面及左肺。</li>
	<li>使用合适的牵开器进一步牵开胸壁，以改善视野和操作空间。使用有齿镊和钝头剪刀去除心包膜。</li>
	<li>将缝针（带7-0 Ethilon缝线）穿过左冠状动脉下方，并在结扎线与动脉之间保留一部分心肌组织，以实现左冠状动脉结扎。成功的冠状动脉闭塞可通过左心室前壁的运动减弱或无运动，以及心电图记录的变化（例如 ST段抬高、QRS波增宽）来确认。</li>
	<li>在第三和第四肋骨处缝合两针（6-0 Ethilon缝线）关闭胸腔。</li>
	<li>使用5-0 Ethilon缝线缝合皮肤。</li>
	<li>术后镇痛：给予一次腹腔注射布托啡诺（0.05 mg/kg）。停止异氟烷麻醉后，动物通常在2-5分钟内自主恢复。最后将小鼠置于温暖的笼中，并在饮水中提供0.6 mg/ml布托啡诺，以预防术后不适。术后24小时内需密切监测小鼠状态。</li>
	<li>心肌梗死后3天进行超声心动图检查以评估心脏功能。成功的手术可通过左心室前壁无运动（见结果部分附带视频）加以验证。实验结束时，取出心脏并储存在-80 °C，用于后续研究，即 基因表达分析。</li>
</ol>

<ol><li>Tabrizchi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-blocker+therapy+after+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev.+Cardiovasc.+Ther%22%5BJournal%5D)">Beta-blocker therapy after acute myocardial infarction.</a> Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 11, 293-296 (2013).</li>
<li>Pell, S., Fayerweather, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+the+incidence+of+myocardial+infarction+and+in+associated+mortality+and+morbidity+in+a+large+employed+population%2C+1957-1983%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Trends in the incidence of myocardial infarction and in associated mortality and morbidity in a large employed population, 1957-1983.</a> N. Engl. J. Med. 312, 1005-1011 (1985).</li>
<li>Ramunddal, T., Gizurarson, S., Lorentzon, M., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiarrhythmic+effects+of+growth+hormone--in+vivo+evidence+from+small-animal+models+of+acute+myocardial+infarction+and+invasive+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Electrocardiol%22%5BJournal%5D)">Antiarrhythmic effects of growth hormone--in vivo evidence from small-animal models of acute myocardial infarction and invasive electrophysiology.</a> J. Electrocardiol. 41, 144-151 (2008).</li>
<li>Thom, T., Haase, N., Rosamond, W., Howard, V. J., Rumsfeld, J., Manolio, T., Zheng, Z. J., Flegal, K., O'Donnell, C., Kittner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2006+update%3A+A+report+from+the+american+heart+association+statistics+committee+and+stroke+statistics+subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2006 update: A report from the american heart association statistics committee and stroke statistics subcommittee.</a> Circulation. 113, 85-151 (2006).</li>
<li>van den Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+cryoinjury-induced+myocardial+infarction+in+the+mouse%3A+A+comparison+with+coronary+artery+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 289, 1291-1300 (2005).</li>
<li>Omerovic, E., Ramunddal, T., Lorentzon, M., Nordlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+neuropeptide+y2+receptor+blockade+on+ventricular+arrhythmias+in+rats+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of neuropeptide y2 receptor blockade on ventricular arrhythmias in rats with acute myocardial infarction.</a> Eur. J. Pharmacol. 565, 138-143 (2007).</li>
<li>Ahn, D., Cheng, L., Moon, C., Spurgeon, H., Lakatta, E. G., Talan, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarcts+of+a+predictable+size+and+location+by+branch+pattern+probability-assisted+coronary+ligation+in+c57bl%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in c57bl/6 mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1201-1207 (2004).</li>
<li>Lindbom, M., Ramunddal, T., Camejo, G., Waagstein, F., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+effects+of+myocardial+creatine+depletion+on+left+ventricular+function+morphology+and+lipid+metabolism%3A+Study+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Card+Fail%22%5BJournal%5D)">In vivo effects of myocardial creatine depletion on left ventricular function morphology and lipid metabolism: Study in a mouse model.</a> J. Card Fail. 14, 161-166 (2008).</li>
<li>Omerovic, E., Bollano, E., Basetti, M., Kujacic, V., Waagstein, L., Hjalmarson, A., Waagstein, F., Soussi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic%2C+functional+and+morphological+consequences+of+postinfarct+cardiac+remodeling+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic, functional and morphological consequences of postinfarct cardiac remodeling in the rat.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 31, 1685-1695 (1999).</li>
<li>Gao, E., Lei, Y. H., Shang, X., Huang, Z. M., Zuo, L., Boucher, M., Fan, Q., Chuprun, J. K., Ma, X. L., Koch, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+efficient+model+of+coronary+artery+ligation+and+myocardial+infarction+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse.</a> Circ. Res. 107, 1445-1453 (2010).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

本报告中演示的左冠状动脉（LCA）结扎手术是一种可靠且可重复的小鼠实验性心肌梗死（MI）诱导方法3, 6。按照本方案进行LCA结扎通常会导致约40%左心室区域发生心肌缺血3。该操作可引起心电图ST段显著改变7，并在心脏前表面出现明显苍白。由于心肌梗死范围较大，术后死亡率可高达30%8, 9。需要注意的是，不同品系动物的心肌梗死面积和心肌梗死后死亡率可能存在差异。该方法具有多个优点：皮肤切口沿腋中线而非前胸壁放置，有利于后续进行超声心动图检查；手术切口缝线不会干扰心脏前壁节段的超声成像。此外，小鼠气管插管可为操作者提供充足手术时间。在胸腔内原位（in situ）结扎LCA比将心脏外翻后结扎更为“生理”，因为后者易引发严重心动过缓和全身性缺氧10。与基于冷冻损伤的方法相比，该技术也具有优势，因为冷冻损伤所引发的病理生理过程与缺血性心肌梗死不同，可能干扰缺血性心肌病机制研究的准确性。我们相信，本视频及配套说明将为现有小鼠实验性心肌梗死技术提供有益补充。
故障排除：</...

小鼠冠状动脉结扎术的改良技术

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

心肌梗死（MI）是人类死亡的最重要原因之一1-3。为了改善MI患者的发病率和死亡率，我们需要更深入地了解心肌缺血的病理生理机制。这些知识可能有助于确定新的治疗靶点，从而推动创新性心血管疗法的发展4。在小鼠中建立实验性心肌梗死模型是目前临床前研究中日益流行的小动物模型，通常通过永久性或暂时性结扎左冠状动脉（LCA）来诱导心肌梗死5。在本视频中，我们将逐步介绍在小鼠中诱导实验性心肌梗死的方法。
首先用2%异氟烷对动物进行麻醉。将失去意识的小鼠进行气管插管，并连接呼吸机以进行人工通气。剃除左侧胸部毛发，沿腋中线在皮肤上做1.5 cm切口。钝性分离左侧胸大肌，直至暴露肋骨。将肌层拉开并用眼睑拉钩固定。完成上述准备后，在第三和第四肋间进行左侧开胸术，以暴露心脏前表面和左肺。随后用7-0 Ethilon缝线结扎LCA动脉近端段，通常可导致梗死范围约占左心室的40%。手术结束时关闭胸腔，动物接受术后镇痛治疗（Temgesic，0.3 mg/50 ml，腹腔注射）。将动物置于保温笼中直至自主恢复。

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td> 仪器</td>
 <td>功能描述</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>钝头剪刀 </td>
 <td>用于剪开皮肤、肋间胸肌和缝线</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>眼睑拉钩</td>
 <td>用于暴露手术视野</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>钝头镊</td>
 <td>用于夹持皮肤和肌肉</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>持针器</td>
 <td>用于夹持缝合针</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5-0 缝线</td>
 <td>用于缝合皮肤</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>6-0 缝线</td>
 <td>用于缝合胸肌</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>7-0 缝线</td>
 <td>用于结扎冠状动脉</td>
 </tr>
 </tbody>...

在小鼠中诱导实验性心肌梗死的手术操作首先在第三和第四肋骨之间进行左侧开胸，以暴露心脏前表面和左肺。随后结扎左冠状动脉，关闭胸腔，小鼠可自行恢复。

心肌梗死（MI）是人类死亡的最重要原因之一1-3。为了改善心肌梗死患者的发病率和死亡率……

本实验的总体目标是在小鼠体内建立心肌梗死模型。首先沿腋中线做皮肤切口，随后通过第三与第四肋间左侧开胸术暴露心脏。然后在左前降支动脉的近端进行结扎。最后关闭胸腔，将小鼠放回笼中使其自然恢复。最终可通过心电图或超声心动图来评估心肌梗死情况。该方法的可视化演示至关重要，因为靠近左侧结扎冠状动脉的操作较难掌握。通过将结扎位置置于左侧开口稍下方，可确保充分的心肌梗死。但需注意避免穿刺左心耳，否则可能导致致命性出血。手术开始时，通过吸入2%至5%的异氟烷对一只六周龄或更年长的小鼠进行麻醉。通过夹捏脚趾以确认动物已充分麻醉。待小鼠完全镇静后，将其转移至手术区域并放置于手术台上。将其背部置于加热垫上。为维持37摄氏度的恒定体温，使用内径为0.2厘米的管路和含2%异氟烷的空气混合气体，通过异氟烷雾化室将小鼠固定在插管装置上。将导管插入小鼠的气管中。剃除小鼠左侧心前区胸部的毛发，然后用碘伏消毒该区域，再用75%乙醇重复擦拭三次。同时使用无菌镊子将眼用软膏涂抹于小鼠眼睛表面。沿腋中线做1.5厘米切口。该入路有助于后续进行超声心动图评估。由于这些小鼠年龄较小，使用剪刀而非手术刀，以避免损伤下方组织。然后使用钝头血管镊，将胸壁上的胸骨前肌分离并牵开。在第三和第四肋之间行左侧开胸术，以暴露心脏前表面和左肺。进一步使用合适的眼睑拉钩牵开胸壁。为了更好地使用牙科镊子和钝头剪刀进行观察和操作，需去除心包膜。接着，准备一根7-0号丝线及缝合针，用于动脉结扎。将缝合针穿过左冠状动脉下方，并在结扎线与动脉之间保留一层心肌组织，以完成左冠状动脉的结扎。通过在第三和第四肋骨上各缝合一针来关闭胸腔。将异氟烷浓度降低至0.5%，并使用5-0的聚乙二醇酸缝线以三针缝合皮肤。术后镇痛给予每千克体重0.05毫克的丁丙诺啡腹腔注射。最后，将小鼠放入温暖的笼子中使其自发恢复，并在饮水中提供每毫升0.6毫克的丁丙诺啡。术后24小时内需密切监测小鼠，以评估心肌梗死的影响。最佳的侵入性方法是在术后数天通过超声心动图评估心脏功能。采用本方案，结扎左冠状动脉可诱导心肌缺血，累及约40%的左心室。这会导致心电图ST段发生显著改变，如以下代表性心电图所示，分别为结扎前和结扎后记录。心肌梗死前。心电图记录的QRS波群较窄且持续时间短。心肌梗死后，明显的ST段抬高与QRS波群融合，使QRS波群比心肌梗死前记录的更宽、更高。为研究心肌梗死的影响，应在心肌梗死手术后数天通过超声心动图评估心脏功能。此处显示的是来自假手术小鼠的超声心动图记录。与假手术小鼠中观察到的良好心肌收缩相比，在心肌梗死小鼠中。心肌梗死（mi）后72小时，在收缩期可见左心室游离壁明显无运动。观看本视频后，您应充分理解该心肌梗死小鼠模型，并能够在您自己的实验室中成功建立该模型。

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改性技术在小鼠冠状动脉结扎

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LAD结扎：一种小鼠心肌梗死模型

在小鼠急性缺血/再灌注损伤和慢性重塑的研究中，涉及多种基因操作和/或心肌内注射基因、蛋白质、细胞和/或生物材料，这些操作随时间维度叠加进行。本视频展示了缺血/再灌注、永久性冠状动脉结扎以及心肌内注射研究的显微外科操作步骤。...

冠状动脉结扎与心肌内注射在小鼠心肌梗死模型中的应用

在本视频中，我们介绍了一种通过永久性结扎左前降支冠状动脉来建立心肌梗死小鼠模型的手术方法。...

建立小鼠心肌梗死模型：小鼠左前降支冠状动脉永久性结扎手术操作流程

关键词：心肌梗死，小鼠模型，左前降支冠状动脉，永久性结扎，开胸手术，心肌缺血，动物模型，心血管疾病

我们介绍一种外科手术方法，用于诱导实验性缺血/再灌注（I/R）损伤，以模拟小鼠模型中的心肌梗死（MI），该方法可更清晰地定位左前降支动脉（LAD）上的结扎位置，从而提高小鼠MI实验的可重复性。...

通过左前降支动脉结扎建立心肌缺血-再灌注损伤的小鼠模型

本文描述了一种在小鼠中建立心肌梗死的高可重复性模型，该模型仅需最少的侵入性操作。该模型易于实施，具有高重复性和高存活率。因此，该模型将减少实验所需的动物数量，符合3R原则（替代、优化和减少）的要求。...

小鼠心肌梗死诱导的微创手术操作

心力衰竭是导致住院的首要原因，也是死亡的主要原因之一。通过建立小鼠左前降支冠状动脉永久性结扎模型，用于研究心肌梗死后的心室重构和心脏功能障碍。本文介绍了在小鼠中进行有创血流动力学测量的技术。...

小鼠左前降支冠状动脉永久性结扎：心肌梗死后心室重构与心力衰竭模型

我们提供了一种在小鼠模型中进行左前降支动脉（LAD）结扎的可靠方法。该方法相较于其他方法侵入性较小，涉及气管插管、左侧开胸入路以及胸腔穿刺。该方法可用于构建急性与慢性心肌梗死（MI）的动物模型。...

小鼠左前降支冠状动脉结扎：一种改进且简化的心肌梗死模型

本文介绍了一种外科手术方法，用于实现小鼠左前降支冠状动脉的永久性结扎。该模型对于研究心肌梗死的病理生理学及其伴随的生物学过程具有重要意义。...

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左冠状动脉结扎：一种小鼠心肌梗死的外科模型

学习小鼠冠状动脉结扎手术技术以建立心肌梗死模型。该方法通过左胸切开术暴露心脏并结扎左前降支动脉，为心血管疾病研究提供可靠的实验平台。

小鼠冠状动脉结扎术的改良技术

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