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取一只转基因小鼠幼崽的大脑。
去除小脑并解剖大脑。分离含有表达荧光蛋白的兴奋性神经元的皮质-海马组织。
将组织转移至含有缓冲液的培养皿中。
将组织切碎并转移至含有木瓜蛋白酶的离心管中。
木瓜蛋白酶可消化组织的细胞外基质，使细胞（包括神经元）松散。
将消化后的组织转移至含有BSA蛋白的离心管中，以终止酶活性并防止细胞损伤。
机械解离组织，释放细胞。
离心并去除含有碎片和酶的上清液。
用低荧光神经元培养基重悬细胞，并通过细胞筛过滤，去除细胞团块。
通过荧光激活细胞分选技术鉴定并分选荧光标记的神经元。
将分选后的神经元转移至微量离心管中并离心。用神经元培养基重悬神经元。
将神经元接种于多孔板中经多聚-L-赖氨酸包被的盖玻片上。神经元会黏附于包被的表面。
加入神经元培养基。孵育以促进神经元生长。
首先，剥离小脑并分离两个半球。然后，仔细分离每个半球中的海马和皮层。将解剖得到的组织转移至含有预冷细胞培养缓冲液的35毫米培养皿中。
然后，将分离出的海马体和皮层转移至另一个35毫米培养皿的皿盖中。使用手术刀片的平边，以交叉方式小心地切碎组织，直至仅剩小块组织为止。
接下来，用少量木瓜蛋白酶溶液将切碎的组织从培养皿盖转移至无菌的木瓜蛋白酶管中。在37摄氏度下孵育组织25分钟。木瓜蛋白酶孵育结束后，将无菌木瓜蛋白酶管和无菌BSA管转移至超净工作台。然后，使用1毫升巴斯德吸管，仅将皮质-海马组织从木瓜蛋白酶管转移至BSA管1中。
为了分散组织中的大块团块，先用1毫升巴斯德吸管反复吹打组织数次。随后，用细尖巴斯德吸管吹打组织七次。30秒后，从BSA管1中转移1毫升下层液体及组织至BSA管2中。
使用细尖巴斯德移液管在BSA管2中反复吹打组织数次。吹打完成后，从BSA管1中转移1毫升含下层组织的溶液至BSA管3。在BSA管3中反复吹打组织数次。
经吹打后，将2号和3号管中的全部溶液和组织转移至含BSA的1号管中，再吹打2到3次，于3,000 × g离心 g 3分钟。离心后，小心移除沉淀组织的上清液，并使用P1000移液器将细胞重悬于2毫升完全Hibernate A低荧光培养基中。随后，吹打组织20次，以确保组织溶液完全重悬。
随后，将细胞悬液通过30微米细胞筛过滤至聚苯乙烯样品管中。通过移液将300微升完全Hibernate A培养基加入所需数量的聚丙烯管中，以制备细胞分选收集管。
针对每种需要分选的荧光细胞类型，选择合适的激发和发射滤光片。使用488纳米激发波长激发静脉蛋白，并通过530/40发射滤光片组检测发射光。
使用531纳米激发波长激发TdTomato蛋白，并通过575/30发射滤光片检测发射光。为获得高纯度，分选荧光标记明亮的细胞。细胞分选后，将收集的细胞转移至2毫升圆底离心管中。随后，在3,000 × g 条件下离心3分钟，形成细胞沉淀。
用预热的完全NBA培养基重悬细胞沉淀，培养基体积根据需要调整，使细胞密度达到每微升1,000个细胞。为确认细胞已充分解离，使用4倍或10倍物镜在显微镜下检查细胞悬液。接种细胞前，以中等速度涡旋震荡2至3秒，以确保细胞悬液均匀。
涡旋后，迅速将10 µL细胞悬液移液至每张盖玻片的中心。1小时后，加入500 µL预热的完全NBA培养基喂养细胞，并放回37°C培养箱中继续培养。