在无血清单层培养中由胚胎干细胞生成神经前体细胞

从一培养小鼠胚胎干细胞开始。

用缓冲液洗涤细胞，以去除培养基和细胞碎片。

加入酶混合液以使细胞从培养瓶表面脱落。

加入培养基以终止酶活性，并将细胞收集至离心管中。离心后弃去含有酶的上清液。

在无血清神经元培养基中重悬细胞。 

将细胞接种到明胶包被的多孔板孔中。

孵育。胚胎干细胞会附着在明胶包被的表面。培养基中的成分，包括营养物质、生长因子和激素，可促进细胞增殖并形成单层细胞。

在此细胞密度下，胚胎干细胞可产生并释放最佳水平的生长因子和细胞因子。

这些分子可触发细胞内信号通路，促进胚胎干细胞分化为神经前体细胞。

将明胶与500毫升温的磷酸盐缓冲液（PBS）混合，并用适量该溶液覆盖细胞培养容器底部，使其刚好覆盖表面即可。在明胶包被的同时，用PBS将未达到汇合状态的小鼠胚胎干细胞培养物冲洗两次。然后，向培养物中加入1毫升解离试剂。

2至5分钟后，轻敲容器，使单层细胞脱落形成单细胞悬液，并用总共10毫升培养基和细胞解离试剂收集培养物。

将细胞转移至15毫升锥形管中，在离心机中离心沉淀。然后小心吸除上清液，将沉淀物重悬于10毫升预热的N2B27培养基中，沿管壁轻轻吹打以避免产生气泡。

现在，计数细胞并记录浓度，然后根据表格，用预热的 N2B27 培养基将细胞重悬至每孔每单位体积所需的细胞数量。接着，吸除培养容器中的明胶，接种细胞时不要晃动容器。

将培养物置于37摄氏度、5%二氧化碳的湿化培养箱中，每隔一至两天用新鲜的N2B27培养基更换培养液。