0 次观看 • 3:14 分钟 • July 8th, 2025
取一培养皿，其中培养有支持于细胞外基质上的人类神经前体细胞，即NPCs。
这些NPC被设计为表达一种荧光蛋白。
弃去培养基，并洗涤细胞以去除残留的培养基。
使用能够破坏基质的酶处理培养物，使细胞解离。
将脱离的细胞转移至离心管中，并加入培养基以中和酶的作用。
离心以沉淀细胞，弃去上清液，并将神经前体细胞重悬于神经分化培养基中。
将神经前体细胞转移至已建立的小鼠星形胶质细胞与大鼠皮层神经元共培养体系中。
已建立的共培养体系所释放的生长因子，以及神经前体细胞与皮层神经元和星形胶质细胞之间的细胞间接触，可促进神经前体细胞向成熟神经元分化。
成熟的神经元表现出延伸的细胞突起，并形成突触连接。
在共聚焦显微镜下，利用荧光蛋白的信号观察人源NPC分化而来的神经元。
在生成诱导性多能干细胞（iPSCs）后，根据文本方案将细胞诱导并维持为人类神经前体细胞（NPC）培养物。在此示例中，NPCs 使用慢病毒载体 Synapsin1-tdTomato 进行标记。将原代神经元加入星形胶质细胞培养物后的第二天，使用 1X PBS 洗涤人类 NPCs 一次。随后，加入细胞解离溶液，并在 37°C 下孵育五分钟。
确保所有细胞均已脱落，然后将其转移至含有两倍体积DMEM/F12的15毫升离心管中，在200 g条件下离心5分钟。弃去上清液，加入神经元分化培养基，轻轻重悬沉淀以获得单细胞悬液。使用血细胞计数板对细胞进行计数。
接下来，小心吸除星形胶质细胞-皮层神经元共培养体系中的培养基。以每平方厘米每孔5,000个细胞的密度将人源神经前体细胞接种于神经元分化培养基中。在37°C、5% CO2条件下培养，并每两至三天更换一次培养基，持续至少28天。
为了确认人iPSCs是否表现出成熟神经元的特性，使用配备60倍水浸物镜的共聚焦显微镜进行观察。通过观察tdTomato荧光来识别由人iPSCs分化而来的细胞。