电刺激诱导的神经干细胞和祖细胞分化

从连接到电源的 MOE 微流控芯片开始。

该芯片包含通过入口和出口连接的聚-L-赖氨酸涂层培养区域，以及用于电气连接的安装 Ag/AgCl 电极。

微流控芯片放在加热器上以获得最佳生长条件。

出口将神经干细胞和祖细胞或 NPC 流入包被培养区域。

细胞与聚-L-赖氨酸静电相互作用并粘附在微流体装置上。

接下来，引入含有促进粘附细胞增殖的生长因子的生长培养基。

通过 Ag/AgCl 电极施加电流更长时间，并持续供应培养基以提高细胞活力。

电流激发并激活鼻咽癌，促进细胞体神经元过程的扩展。

此外，电刺激会触发各种细胞内信号通路。

这些途径促进鼻咽癌特异性分化为各种神经细胞，如神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。

首先，使用适当的软件绘制单个 PMMA 层和双面胶带的图案。打开二氧化碳激光划线器并将其连接到个人电脑。使用软件打开设计图案文件。

PMMA 片材或双面胶带放在激光划线机的平台上。然后，使用自动对焦工具将激光聚焦到 PMMA 片材或双面胶带的表面上。选择激光划线器作为打印机。然后，使用激光划线器开始在 PMMA 片材或双面胶带上进行直接烧蚀。

从PMMA片材上取下保护膜，并使用氮气清洁表面。为了将多层 PMMA 片材粘合在一起，将三片 1 毫米的 PMMA 片材堆叠在一起，并在每平方厘米 5 公斤的压力下在热粘合机中粘合 30 分钟，在 110 摄氏度下形成流动或电刺激通道组件。用速效氰基丙烯酸酯胶将 12 个适配器粘附到 MOE 芯片组件第一层的各个开口上。

组装芯片之前，使用紫外线照射对 1 毫米 PMMA 基板、双面胶带和 3 毫米光学级 PMMA 进行消毒 30 分钟。用双面胶带将 1 毫米 PMMA 基板粘附在 3 毫米光学级 PMMA 上，以完成 PMMA 组装。用双面胶带将清洁后的盖板玻璃粘在 PMMA 组件上。

用白色手紧塞密封琼脂桥适配器的开口。通过介质入口和出口适配器将平底连接器连接到 MOE 芯片组件。然后，将锥形鲁尔适配器连接到三通旋塞阀。使用连接到介质入口的三通旋塞阀的 3 毫升注射器加入 2 毫升 0.01% PLL 溶液，并将空的 3 毫升注射器连接到介质出口的三通旋塞阀。

PLL溶液填充细胞培养区域，并缓慢地来回泵送包被溶液。关闭两个三通旋塞阀以将溶液密封在培养区域内。将MOE芯片在37摄氏度下在充满5%二氧化碳气氛的培养箱中孵育过夜。打开两个三通旋塞阀，使用两个注射器手动在通道中来回泵送涂层溶液，冲走通道中的气泡。

3毫升完全培养基吸入连接到培养基入口的三通旋塞阀的3毫升注射器中，并加入以替代细胞培养区域中的包被溶液。用鲁尔适配器更换白色手紧插头，并注射 3% 热琼脂糖填充适配器。将鲁尔锁注射器连接到鲁尔适配器，并通过黑色橡胶塞注入 3% 热琼脂糖以填充鲁尔锁注射器。等待 10 至 20 分钟，让琼脂糖冷却并凝固。

将电池种子MOE芯片安装到透明ITO加热器上，该加热器固定在可编程XYZ电动载物台上，温度保持在37摄氏度。通过介质出口手动泵入MOE芯片，注入mNPC。然后，将细胞接种的MOE芯片在ITO加热器上孵育4小时。

使用电线通过芯片上的电极将 EF 多路复用器连接到 MOE 芯片。将EF多路复用器和函数发生器连接到放大器以输出方波直流脉冲。