从成年小鼠大脑的皮层中分离小胶质细胞

取一个新鲜收获的小鼠脑皮层。

组织切成小碎片。将它们转移到含有含有 RNase 抑制剂和 DNase 的缓冲液的冷冻均质机中。

最佳方式均质组织以将细胞释放到悬浮液中，选择性地保留小胶质细胞，因为它们能够承受剪切力并维持膜活力，同时消除神经元和其他神经胶质细胞。

此外，RNase 抑制剂降解 RNase，而 DNase 降解任何污染 DNA。

细胞悬液通过细胞过滤器以去除组织碎片。

细胞悬液转移到管中。离心并除去含有酶的上清液。将细胞重悬于缓冲液中。

添加抗髓鞘磁性微珠。这些微珠靶向髓鞘蛋白，结合髓鞘碎片和少突胶质细胞。

将细胞-珠混合物加载到包含具有铁磁球的基质的耗尽柱中。

施加的磁场下，微珠结合的髓鞘碎片和少突胶质细胞保留在柱内，而小胶质细胞通过。

用缓冲液洗涤色谱柱并收集含有小胶质细胞的流通液。

首先，用剃须刀片将每个大脑区域切成小于 1 立方毫米的细块。使用切掉尖端的 1 毫升移液器，将组织碎片转移到预冷的 Dounce 均质器中。通过缓慢地将活塞在 Dounce 均质器中扭入和扭出 6 至 10 次，直到不存在可见块，使组织均质化。然后，通过 70 微米过滤器将解离的组织转移到 50 毫升管中。

用总共 6 毫升冷介质 A 冲洗每个 Dounce 均质器和活塞，然后将冲洗液转移到 15 毫升管中进行离心。将单细胞悬浮液在 400 倍 g 和 4 摄氏度下离心 5 分钟，并在 5 度时休息。

装有 3 毫升 MCS 的磁选机中冲洗一根大排液柱和三根大选择柱。组织样品的离心完成后，移液并丢弃上清液，而不会干扰沉淀。将细胞重悬于含有RNase抑制剂的MCS缓冲液中。

每个含有皮质和小脑重悬细胞的管中加入100微升髓鞘去除珠，并将50微升髓鞘去除珠加入每个含有来自海马体和纹状体的重悬细胞的管中。将试管在冰上孵育 10 分钟。

之后，将 MCS 添加到含有皮质细胞的管中，使其体积达到 2 毫升，并将其添加到剩余的管中，使其每个体积达到 1 毫升。一旦色谱柱中的冲洗缓冲液被清空，将 2 毫升皮质细胞加载到大耗竭柱上，将 1 毫升其他细胞悬液加载到单独的大选择柱上。接下来，用 1 毫升 MCS 缓冲液洗涤大耗尽柱一次，每次洗涤使用 1 毫升 MCS 缓冲液洗涤每个大选择柱两次。