从成年小鼠大脑皮层中分离小胶质细胞

取新鲜收获的小鼠脑皮层。 

将组织切成小片段，转移到预冷的匀浆器中，匀浆器内含有带RNase抑制剂和DNase的缓冲液。 

充分匀浆组织，以将细胞释放到悬浮液中，利用微胶质细胞耐受剪切力并保持膜完整性的特性，选择性地保留微胶质细胞，同时去除神经元和其他胶质细胞。

此外，RNase抑制剂可降解RNase，而DNase可降解任何污染的DNA。

通过细胞滤网过滤细胞悬液，以去除组织碎片。

将细胞悬液转移至离心管中。离心后弃去含有酶的上清液。用缓冲液重悬细胞。

加入抗髓鞘磁性微珠。这些微珠可靶向髓鞘蛋白，结合髓鞘碎片和少突胶质细胞。

将细胞-珠混合物加载到去除非柱中，该去除非柱包含带有铁磁性球体的基质。 

在施加的磁场下，  微珠结合的髓鞘碎片和少突胶质细胞保留在柱内，而小胶质细胞则通过柱体。

用缓冲液洗涤层析柱，并收集含有小胶质细胞的流穿液。

首先，使用剃刀片将每个脑区切成小于1立方毫米的细小组织块。用剪去尖端的1毫升移液器，将组织块转移至预冷的Dounce匀浆器中。通过缓慢地将杵子在Dounce匀浆器中推入和拉出，进行6到10次完整的研磨，直至无可见的组织块为止。然后，将解离后的组织通过70微米细胞筛过滤，收集到50毫升离心管中。

用总共 6 毫升的预冷溶液 A 冲洗每个 Dounce 匀浆器及其研杵，然后将冲洗液转移至 15 毫升离心管中进行离心。在 4 摄氏度条件下，以 400 × g 离心 5 分钟，刹车设置为 5，对单细胞悬液进行离心。

用 3 毫升 MCS 缓冲液在磁力分离器中冲洗一个大型耗竭柱和三个大型选择柱。组织样本离心完成后，用移液器吸出上清液并弃去，注意不要扰动沉淀。将细胞重悬于含有 RNase 抑制剂的 MCS 缓冲液中。

向每管含有皮层和小脑重悬细胞的样品中加入 100 微升髓鞘去除磁珠，向每管含有海马和纹状体重悬细胞的样品中加入 50 微升髓鞘去除磁珠。将各管置于冰上孵育 10 分钟。

此后，向含有皮质细胞的离心管中加入MCS，使其体积达到2毫升；向其余各管中分别加入MCS，使每管体积达到1毫升。当清洗缓冲液完全流尽后，将2毫升皮质细胞悬液加载至大型去除柱，将每种其他细胞悬液各1毫升分别加载至不同的大型富集柱。接着，用1毫升MCS缓冲液洗涤大型去除柱一次，再用每次1毫升的MCS缓冲液对每个大型富集柱各洗涤两次。