在微电极阵列上将人诱导多能干细胞分化为神经元

取转导的人诱导性多能干细胞（hiPSCs），该细胞通过多西环素诱导的抗生素诱导系统驱动神经基因-2的过表达。

将它们转移至多孔微电极阵列孔中经黏附蛋白包被的活性电极区域。

让hiPSCs附着于包被的活性电极区域。

加入含有强力霉素的培养基，以诱导神经特异性转录因子神经源性基因2的过表达。

Neurogenin-2 可激活分子通路，促进 hiPSC 向神经前体细胞分化，同时培养基成分有助于细胞存活。

将星形胶质细胞接种到微电极阵列孔中，使其黏附于电极的活性区域。

用含有神经生长因子、多西环素和细胞生长抑制剂的神经基础培养基替换培养基。

该抑制剂可抑制星形胶质细胞增殖，并清除未分化的hiPSCs。

随着时间的推移，持续的神经原性蛋白2（neurogenin-2）表达和生长因子促使神经前体细胞分化为神经元。

此外，更换为含有血清的Neurobasal培养基，以维持星形胶质细胞的存活。

星形胶质细胞分泌促进神经元成熟和突触形成的生长因子，从而形成神经网络。

对于六孔MEA，将细胞稀释至每毫升含7.5 × 10⁵个细胞的细胞悬液。吸除六孔MEA中的稀释层粘连蛋白。在六孔MEA中，通过向每个孔的活性电极区域加入100微升细胞悬液来接种细胞。

接下来，将六孔MEA置于湿润的37摄氏度培养箱中。两小时后，向六孔MEA的每孔中小心加入500微升配制好的E8培养基。随后，将六孔MEA在湿润的37摄氏度培养箱中过夜培养。

第3天，将0.05%胰蛋白酶-EDTA恢复至室温。将含1%青霉素-链霉素的DPBS置于DMEM/F-12中，预热至37摄氏度。然后，吸除大鼠星形胶质细胞培养物中的旧培养基。加入5毫升DPBS清洗培养物，并轻轻晃动。

随后，吸除DPBS，加入5毫升0.05%胰蛋白酶-EDTA。轻轻晃动培养皿使胰蛋白酶-EDTA均匀分布。然后将细胞置于37摄氏度、湿润的培养箱中孵育5至10分钟。接着在显微镜下观察，检查细胞是否已脱落。

通过轻拍培养瓶数次使最后的细胞脱落。随后向培养瓶中加入5毫升DMEM/F-12培养基。使用10毫升移液器在瓶内轻轻吹打细胞。之后，将细胞悬液收集至15毫升离心管中。以200 × g离心该管 g 八分钟。

随后，吸除上清液，并将细胞重悬于 1 毫升 DMEM/F-12 培养基中。使用血细胞计数板测定每毫升细胞数量。

接下来，向六孔MEA的每孔中加入7.5 × 10⁴个星形胶质细胞，向24孔板的每孔中加入2 × 10⁴个星形胶质细胞。将细胞置于37摄氏度、湿润的培养箱中过夜培养。