使用悬滴培养技术制备神经元球

以神经基础培养基中的小鼠胚胎神经祖细胞单细胞悬液开始实验。

培养基含有维持细胞活力所必需的营养物质。

将该细胞悬液滴加少量于非黏附性培养皿的盖子上，确保液滴之间保持一定间距。

倒置盖子，形成悬滴。

将盖子置于含有缓冲液的培养皿上方，以建立一个湿润环境，防止培养基蒸发，并进行孵育。

在悬滴中，液体的表面张力维持着液滴的形状。

这种形状限制使细胞在有限空间内无法铺展。

此外，液滴内的重力作用将细胞导向下方区域。

当神经前体细胞相互靠近时，会自发聚集形成一种称为神经球的三维结构。

制备神经球时，使用NGB培养基将细胞悬液的细胞密度调整至每毫升100万个细胞。在培养皿的底部加入7毫升PBS。将皮层神经元以每滴10,000个细胞的密度，用10微升悬液制成悬滴，置于10厘米培养皿上盖内侧。将培养皿置于37摄氏度、5% CO₂及湿润条件下培养箱中培养3天，以促进神经球形成。