使用塑料微流控芯片的区室化原代小鼠神经元培养

取一个由体细胞储液池和腔室以及轴突储液池和腔室组成的塑料微流控芯片，这些腔室通过微沟槽相连。

加入预包被溶液以充分浸润各区域和沟槽，防止气泡滞留。

吸去溶液，保留主室中的液体。用缓冲液洗涤。

用一种促进神经元黏附的合成聚合物包被孔板。用缓冲液洗涤，并加入培养基以防止芯片干燥。

接种大鼠海马神经元悬液时，吸除培养基。

将悬液加入体细胞储液池中。神经元进入并与胞体区室结合。

向孔中加入神经元培养基并进行培养。培养基中存在的生长因子可促进神经元生长。

逐渐地，神经元延伸出轴突，轴突通过微通道生长至轴突区室中。

沟槽的狭窄结构阻止了神经元胞体的进入，从而确保了胞体区与轴突区的物理分离。

首先，将一个无菌的多室芯片放入培养皿中。向芯片的左上方孔中加入100微升预包被溶液，并使其流经主通道进入相邻的孔。接着，向芯片的左下方孔中加入100微升预包被溶液。

这一次，等待五分钟，使溶液流经微通道。现在，向右上方的孔中加入100微升预包被溶液，并使其流经主通道进入相邻的孔。90秒后，用100微升预包被溶液填充右下方的孔，并将芯片孵育10分钟。

将移液器吸头小心地倾斜远离主通道，并从每个孔中吸取溶液。然后，立即向左上方的孔中加入 150 µL PBS，静置 1.5 分钟。接着，向左下方的孔中加入 150 µL PBS，静置五分钟，使液体流经微沟槽。

然后，按顺序向右上和右下孔中各加入 150 微升 PBS。10 分钟后，再次吸除 PBS，并重复洗涤步骤第二次。第二次洗涤完成后，将移液枪头尖端倾斜远离通道开口，按之前方法吸除各孔中的 PBS。

然后，向芯片左上方的孔中加入 100 微升浓度为 0.5 毫克/毫升的多聚-D-赖氨酸溶液。等待 1 分半钟后，用 100 微升多聚-D-赖氨酸溶液填充左下方的孔。在芯片右侧重复此操作。盖上培养皿，然后将芯片置于 37 摄氏度的培养箱中孵育 1 小时。

孵育后，用 PBS 按前述方法冲洗芯片两次。接着，将 PBS 从装置中吸出。立即向芯片的左上孔加入 100 微升细胞培养基。1.5 分钟后，向左下孔加入培养基。

等待五分钟，使培养基流过微通道，然后在芯片的右侧重复加样过程。根据既定方案制备解离的大鼠海马神经元细胞悬液。吸除芯片各孔中的大部分培养基，但保留通道内充满液体。

接下来立即吸取5 µL细胞悬液加入右上方的孔中，再吸取另外5 µL细胞悬液加入右下方的孔中。加样时，将移液器枪头对准主通道。加样完成后，将芯片转移至显微镜载物台上，确认神经元位于主通道内。

等待细胞贴壁5分钟后，向右上和右下孔各加入约150微升神经元培养基。随后，向左上和左下孔各加入150微升培养基。盖上培养皿，将芯片置于加湿托盘中，放入含5%二氧化碳、37摄氏度的培养箱内。