小鼠星形胶质细胞直接重编程为神经元

从含有基因改造星形胶质细胞的多孔板开始。这些细胞贴附于置于星形胶质细胞培养基中的盖玻片上。

这些基因改造细胞表达转化因子，可强制其转变为神经元。该过程称为神经元重编程。

取含有特定分子和B27添加剂的神经元分化培养基。这些组分共同为细胞分化提供必要的营养物质和因子。

将星形胶质细胞培养基更换为神经元分化培养基。

将星形胶质细胞孵育所需的时间。

孵育过程中，星形胶质细胞表达的转化因子会触发一系列分子事件，从而促使星形胶质细胞转化为神经元。

转化的神经元具有较小的胞体和细长的突起，类似于典型的神经元。

通过将1毫升B27添加剂加入49毫升基础培养基中，制备神经元分化培养基。根据细胞是否已进行转导或转染，在24至48小时后，将每孔中的星形胶质细胞培养基更换为1毫升神经元分化培养基。将细胞在37°C、含9%二氧化碳的条件下培养。

为了提高重编程效率，在将星形胶质细胞培养基更换为神经元分化培养基时，向分化培养基中添加Forskolin和Dorsomorphin，使其终浓度分别为30微摩尔和1微摩尔。若选择使用Forskolin和Dorsomorphin处理细胞，则在初次处理后的两天追加第二剂Dorsomorphin，直接将其加入培养基中。