0 次观看 • 4:06 分钟 • July 8th, 2025
从在细胞分化培养基中培养的神经细胞开始。
将金纳米棒加入培养基中。
孵育，使细胞通过称为内吞作用的过程吞噬纳米棒。
用激光激发纳米棒。
激光束激发纳米棒表面的电子。受激电子随后回到基态，释放出热能。
这种热刺激神经细胞产生由一种称为βIII-微管蛋白的特定细胞骨架蛋白支持的突起。
移除用过的培养基。
固定细胞。加入适当的去垢剂以透化细胞膜。
加入封闭剂以防止抗体的非特异性结合。
使用靶向 βIII-微管蛋白的一抗对细胞进行标记。
加入与一抗结合的荧光标记二抗。
使用蓝色荧光染料对细胞核进行染色。
使用落射荧光显微镜观察呈红色的细胞及其蓝色细胞核。
细胞的细长突起表明神经细胞分化。
在T75培养瓶中加入10毫升细胞培养基培养NG108-15神经细胞，随后在37°C的湿润环境中孵育。当细胞融合度达到70%至80%时，更换为温热的新鲜培养基。
随后，通过轻轻敲击汇合培养瓶的底部，机械性地使细胞脱离。将细胞悬液在600 g 条件下离心5分钟，并将细胞沉淀重悬于2毫升预热的细胞分化培养基中。然后，将细胞接种至96孔板中，每孔加入200微升细胞分化培养基。
将样品在 37 摄氏度下孵育一天。第二天，加入金纳米棒溶液，并继续孵育额外 24 小时。在此步骤中，将激光器与单模光纤耦合，并以 FC 连接器终止。使用标准功率计测量激光输出功率。
在纳米棒孵育的第3天，将FC连接器固定至孔板，于室温下使用不同激光功率的连续波照射样品及对照组，每组照射1分钟。在第5天，从样品中移除细胞分化培养基，并用体积分数为3.7%的甲醛溶液固定10分钟。
然后，用体积分数为0.1%的Triton X-100处理细胞20分钟以进行通透。随后，加入质量体积分数为3%的BSA，孵育60分钟以封闭未反应的蛋白质结合位点。在4摄氏度下用抗beta-3-tubulin抗体对样本避光孵育过夜。
第二天，在避光条件下用合适的二抗孵育细胞90分钟。随后，用DAPI对细胞核染色10分钟，然后使用落射荧光显微镜或共聚焦显微镜对样品成像，物镜倍数至少为20倍。根据所用二抗选择相应的显微镜滤光片，并选用DAPI滤光片以观察细胞核。